标本采集
对怀疑肺炎支原体感染的患者采集痰、咽拭子、鼻咽洗液和支气管分泌物。立即送检和接种。不能及时接种的标本，应放置4℃保存并于24小时内接种。
培养条件
支原体的营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10%～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇和酵母。支原体的最适pH 7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲支原体最适pH 6.0～6.5。支原体的培养37℃即可，当然，初次培养37℃，5%～10%CO2效果更好。人型，肺炎，24～48小时即可达到对数生长期。
培养方法
分离培养是支原体实验室诊断的惟一方法。大多数支原体兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落（圆形，直径10～16μm），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。解脲支原体在含尿素和以硫酸锰为产氨指标的完全诊断培养基上生长良好，形成具有特征性的深棕色菌落。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。
