规格 | 价格 | 库存 |
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50管/48样 | ¥ 800 | 2 |
50管/24样 | ¥ 500 | 1 |
需仪器及自备试剂:
1、分光光度计(比色测定波长为530nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按说明操作加入样本、R1、R2、R3,37ºC反应15分钟
2、按说明操作加入R4、R5,混匀
3、530nm波长1cm光径,比色
一、测定原理:
NOS催化L-Arg和分子氧反应生成NO,NO与亲核性物质生成有色化合物,在.530nm波长下测定吸光度,根据吸光度的大小可计算出NOS活力。
二、试剂组成与配制:(50管/48样)
试剂一:底物缓冲液6mlx2瓶,-20C 以下避光冷冻保存3个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以-20°C以下避光冷冻保存以备下次再用。
试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂x3支,稀释液0.6 mlx3支。-20C 以下冷冻保存6个月。测试前取稀释液一支0.6ml 加入一支粉剂中充分混匀
(即将1.5ml离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液体弹下来),测试后剩余的试剂可放入-20C以下冷冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色,则不可以再用。
试剂三:黄色显色剂6ml×1瓶,4℃避光冷藏保存3个月。
试剂四:透明剂6ml×1瓶,室温保存6个月。天冷后会凝固,37℃水浴变澄清时再使用。试剂五。终止剂60mlx2瓶,4C保存6个月。室温低会出现浑浊,37℃水浴至透明再用。
三、注意
1、促进剂最好现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则-20℃以下保存不超过一周;未配制之前的2号促进剂和稀释液均应-20C以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
2、NOS活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,应置-20℃ 以下冷冻保存。3、试剂一与配制好的试剂二应避免反复冻融。
4、室温低时,NOS 5号会出现浑浊,如果已经在测试管中加入了NOS 5号,可将测试管对着灯光,观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管37C水浴锅中晃动5分钟,再比色。