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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50管/48样 | ￥ 520 | 10 |
丙酮酸检测试剂盒（比色法）
产品简介：
丙酮酸(Pyruvic acid，PA)又称 2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰辅酶A 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用，丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法或二硝基苯肼比色法。
雅吉生物丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)检测原理是在酸性条件下,丙酮酸与
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
| 名称规格（YS1059） | 50T | 存储 |
| 试剂(A): 丙酮酸标准(6mg/ml) | 1ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(B): 组织匀浆液（3x） | 2x100ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(C): 苯肼显色液 | 30ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(D): PA Assay Buffer (1.5x) | 100ml | RT |
自备材料：
1、蒸馏水
2、分光光度计、比色杯、离心管或小试管
操作步骤(仅供参考)：
自备材料:
操作步骤(仅供参考):
1、配制组织匀浆液(1x):取 10m| 组织匀浆液(3x)加入 20ml 蒸馏水即成.
2、配制 PA Assay Buffer (1x):取 10m PA Assay Buffer (1.5x)加入5ml 蒸馏水即成
3、准备样品:
①血清、尿液及其他体液样品:血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定
尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存.
②组织样品:称取 2g 组织样品置于匀浆器中，再加入 2ml组织匀浆液(1x)仔细研磨振摇提取，静置，取上清液 4000rpm 离心，取上清液，用组织匀浆液(1x)定容至 4ml
-20℃冻存，用于 PA 的检测。
③植物材料:称取 2g 植物材料置于匀浆器中，再加入 2m 组织匀浆液(1x)仔细研磨
振摇提取，静置，取上清液 4000rpm 离心 10min，取上清液，用组织匀浆液(1x)定
容至 4ml，-20°℃冻存，用于 PA 的检测。
④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的 PA，可以使用原有的裂解液或 PBS 等进行
稀释，如鸡血清可稀释 5~10 倍后检测。
配制标准品工作液:如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水
=1:99的比例配制,使浓度达到 60ug/ml;如果检测组织样品,按丙酮酸标准(6mg/ml):
组织匀浆液(1x)=1:99 的比例配制，使浓度达到 60μg/ml。
a、检测血清、尿液等样品时，按下表操作:
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 丙酮酸标准(60μg/ml,蒸馏水配制) | 0.03 | 0.07 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 |
| 蒸馏水 | 0.87 | 0.98 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 |
| 丙酮酸浓度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 12 | 24 | 36 |
b，检测组织样品时，按下表操作：
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 丙酮酸标准(60μg/m,匀浆液配制) | 0.03 | 0.07 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 |
| 组织匀浆液(1×) | 0.87 | 0.98 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 |
| 丙酮酸浓度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 12 | 24 | 36 |
5，PA 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的 PA 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
a、 检测血清、尿液等样品时，按下表操作：
| 加入物(ml) | 空白管(血清等) | 标准管 | 测定管 |
| 蒸馏水 | 0.9 | — | — |
| 蒸馏水稀释后的各丙酮酸标准 | — | 0.9 | — |
| 待测样品 | — | — | 0.9 |
| 苯肼显色液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 充分混匀 | |||
| PA Assay Buffer | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
b，检测组织样品时，按下表操作
| 加入物(ml) | 空白管(组织等) | 标准管 | 测定管 |
| 组织匀浆液 | 0.9 | — | — |
| 匀浆液稀释后的各丙酮酸标准 | — | 0.9 | — |
| 待测样品 | — | — | 0.9 |
| 苯肼显色液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 充分混匀 | |||
| PA Assay Buffer | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
6，PA 检测：混匀静置，其中空白管呈淡黄色，标准孔依次呈不同程度的棕红色。用分光光度计 520nm，以空白管调零，比色杯光径 1cm，读取标准管、测定管的吸光度(记为A标准、A测定)。
计算：
以各丙酮酸标准浓度(1~6 号)为横坐标，以对应各丙酮酸标准 A标准 为纵坐标，绘制丙酮酸标准曲线，血清、尿液等的丙酮酸含量直接根据标准曲线求得。
组织丙酮酸(μg/g)=A×N/m 血清丙酮酸(μg/ml)=A×N
式中：
A=通过标准曲线计算样品的丙酮酸浓度(μg/ml)
N=稀释倍数
m=样品的质量(g)
注意事项：
1、所加试剂顺序不可颠倒，先加丙酮酸标准液或待测液，再加组织匀浆液(1×)，最后加PA Assay Buffer(1×)。
2、配制的丙酮酸标准(60μg/m)应 4℃避光保存，24h 有效。
3、组织匀浆液有腐蚀性，应小心操作。
4、健康成年人空腹静脉全血丙酮酸含量为 3~9μg/ml。
5、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，检测样品量会相应增加。
6、标准曲线的各点应分布均匀，范围适中。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：6 个月有效。低温运输，按要求保存。
