规格	价格	库存
50管/48样	￥ 380	200

注意：

1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；

2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；

谷氨酸含量测定试剂盒测定意义：

谷氨酸（Glu）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理：

用高氯酸溶液提取测试样品中的游离L-(+)-谷氨酸(C₅H₉NO₄)。NAD在谷氨酸脱氢酶的存在下被L-(+)-谷氨酸还原。所得到的NADH在心肌黄酶的存在下与INT反应。在490nm波长下测量所得甲瓒的含量,并计算测试样品的游离L-(+)-谷氨酸含量。

自备仪器和用品：

酶标仪、96孔板、可调式移液器、低温离心机、震荡仪、pH试纸、冰、蒸馏水

谷氨酸含量测定试剂盒试剂清单：

试剂名称	规格	数目	贮藏
提取液	液体 55mL	x1	4°C
试剂一	液体 40mL	x1	4°C
试剂二：A液	液体 10mL	x1	4°C
试剂二：B液	液体 2.5mL	x1	4°C
试剂三	粉剂	x1	-20°C,避光
试剂四	粉剂	x1	-20°C,避光
试剂五	粉剂	x1	-20°C,避光
试剂六	粉剂	x1	-20°C,避光
标准品母液	液体 2mL	x1	4°C,避光	1g/L L-谷氨酸标准溶液

样本处理（按照步骤依次操作）：

一、组织样本

1、按照质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例加入提取液，冰浴匀浆；

（样本取样量记为W，提取液用量记为V_提）

（建议先尝试0.2g：1mL的比例；样本含量较低的可增加样本量；样本量较少时可等比例减少样本与提取液）

3、然后2,000g离心力 10℃ 离心10min，取上清液；

（动物样本可能会有飘浮在上层的脂肪，注意不要吸取到）

4、取300μL上清液，滴加试剂一（约300μL左右）调pH至9~10，然后用蒸馏水补足液体至1mL；

（上清液取样量记为V₁，终体积记为V₂）

（加入试剂一会有白色沉淀产生为正常现象；蒸馏水补足体积按照液体添加量计算，例如300μL上清液，加入300μL试剂一，则补充400μL蒸馏水）

5、然后2,000g离心力 10℃ 离心5min，取上清液待测（记为样本待测液）；

二、液体样本

1、取100μL样本，加入200μL提取液，充分混匀；

（样本取样量记为V，提取液用量记为V_提）

（样本量较少时可等比例减少样本与提取液）

6、然后2,000g离心力 10℃ 离心10min，取上清液；

7、取100μL上清液，滴加试剂一（约66μL左右）调pH至9~10，然后用蒸馏水补足液体至300μL；

（上清液取样量记为V₁，终体积记为V₂）

（加入试剂一会有白色沉淀产生为正常现象；蒸馏水补足体积按照液体添加量计算，例100μL上清液，加入66μL试剂一，则补充134μL蒸馏水）

8、然后2,000g离心力 10℃ 离心5min，取上清液待测（记为样本待测液）；

注意：

1、不同批次试剂调pH所需试剂一用量存在浮动，建议操作时额外加个测试管，用于摸索试剂一用量，其余样本管可直接参照用量加入；

2、试剂一为1mol/L KOH-水溶液，如果调pH时容易过碱，可用蒸馏水将试剂一做适当稀释；

3、提取液、试剂一有腐蚀性，接触皮肤、眼睛可造成伤害，操作时应做好防护；

实验准备：

1、试剂三的制备：管中加入750μL蒸馏水，充分溶解，冰上放置；

（用不完的试剂 -20°C避光保存）

9、试剂四的制备：管中加入750μL蒸馏水，充分溶解，冰上放置；

（用不完的试剂 -20°C避光保存；不可反复冻融，建议根据每次使用量分装保存）

10、试剂五的制备：管中加入750μL蒸馏水，充分溶解，冰上放置；

（用不完的试剂 -20°C避光保存）

11、试剂六的制备：管中加入750μL蒸馏水，充分溶解，冰上放置；

（用不完的试剂 -20°C避光保存；不可反复冻融，建议根据每次使用量分装保存）

（粉剂试剂开盖前甩下或离心使粉剂落入底部后小心开盖）

12、试剂二的配制：

试剂名称（mL）	试剂二 (5mL)
试剂二：A液	4
试剂二：B液	1
混匀，4°C可保存2个月，用前回温到室温(25°C)

13、酶标仪预热30min以上，调节波长至490nm；

14、标准品的配制：将标准品母液(1g/L) 用蒸馏水稀释至60、40、20、10、5 mg/L待测；

(也可根据自身实验需求调整标准品浓度)

15、工作液的配制：

试剂名称（μL）	工作液 (200μL)
试剂二	60
试剂三	10
试剂四	10
试剂五	10
蒸馏水	110
混匀，用多少配多少，现用现配室温避光

谷氨酸含量测定试剂盒测定操作：

1、在96孔板中依次操作

试剂名称（μL）	测定管	标准管
工作液	200	200
样本待测液	40	-
标准品	-	40
混匀，室温(25°C)避光静置5min 于490nm测定吸光值A1
试剂六	10	10
混匀，室温(25°C)避光静置15min 于490nm测定吸光值A2 △A= A2- A1

谷氨酸含量测定试剂盒

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