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100管/96样	￥ 600	10

注意：正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：

在酸性环境下，抗氧化物质还原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 120mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 20 mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体 2 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 2 mL×1 瓶，避光保存
样品的制备：

(1)血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2)组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后离心 10min（10,000g离心力，4℃），取上清，置冰上待测。

(3)细胞样品

按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；离心 10min（10,000g离心力，4℃），取上清，置冰上待测。

操作步骤：

1、酶标仪预热 30min，调节波长至 593nm。

2、 混合液：根据使用量，将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，现用现配，使用前 37℃ 预热。

3、操作表

试剂名称（μL）	测定管	空白管（只做一管）
样品	10
提取液		10
混合液	190	190
充分混匀，反应 20min，于 96 孔板，测定 593nm 吸光值， △A= A 测定-A 空白

注意：若测定管吸光值大于 1.5 则需要用提取液稀释（计算公式中乘以稀释倍数）。
总抗氧化能力计算公式：

标准曲线：y = 1.2416x + 0.0134R2 = 0.9996

x:Trolox 浓度(μmol/mL) y:吸光值差值△A

单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的总抗氧化能力。

（1）按样本质量计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/g 鲜重）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷(V 样÷V 样总×W)

=0.8054×（△A-0.0134）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)

=0.8054×（△A-0.0134）÷Cpr

（3）按细胞计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/10⁴cell）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））

= 0.8054×（△A-0.0134）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/mL）=（△A-0.0134）÷1.2416

=0.8054×（△A-0.0134）

V 样总：加入提取液体积，1 mL；

V 样：反应中样品体积，10μL；

W：样品质量，g；

Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

1.试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2.尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3.样品中不宜添加Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

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