规格 | 价格 | 库存 |
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EB分子中的锭是由一个苯基和一个三环菲锭环构成,苯基可以绕三环菲锭环旋转,而三环菲锭环是一个整体,呈扁 平状,十分类似于DNA结构中的AT碱基配对,故能以与DNA螺旋轴线垂直的方式嵌入到DNA碱基对之间。其结合力是范德华力和碱基相堆积力,其外围的苯基和乙基基团还能扣在DNA的大沟上,使结合更加稳定。插入DNA后锭与水脱离,而水是荧光淬灭剂,所以在DNA中锭的荧光强度恢复,荧光产率比溶液中游离锭的荧光产率高20-30倍。EB的荧光 需要波长为254 nm、302 nm或366 nm的激发光激发,但作用原理各不相同。254 nm的紫外辐射能量是先由DNA吸收(核酸在260 nm左右的光吸收特性)再将其传递给EB分子,302 nm和366 nm的紫外辐射能量是靠EB分子自身吸收。EB分子所得到能量在590 nm的橙红色光谱区以0.3的量子产率重新发射出来,所以DNA-EB复合物呈红色。由于254 nm紫外光对DNA的损伤较强,而在366 nm紫外光下EB产生的荧光又较弱,所以人们一般使用302 nm的紫外光来观察EB染色后的核酸。
EB与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性,在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个EB分子,此时 的DNA长度将增加27%。EB还可以结合到单链DNA或RNA分子内形成的较短的链内螺旋上,所以也可以检测单链DNA 或RNA,但是EB对单链核酸的亲和力相对较小,灵敏度较低。在凝胶中有EB存在的情况下,DNA的电泳迁移率会降低15%左右。