产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
pShuttle-CMV-C-FLag是自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端FLag tag(FLag标签)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后，需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。
pShuttle-CMV-C-FLag含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。
本质粒为卡那霉素抗性。
重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。
pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经预转化了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。
目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。
pShuttle-CMV-C-FLag质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| left inverted terminal repeat | 1–103 |
| encapsidation signal (ES) | 183–331 |
| CMV promoter | 341–933 |
| multiple cloning site | 940–994 |
| FLag tag | 999-1025 |
| SV40 polyA | 1045–1251 |
| Ad5 right arm homology | 1256–3510 |
| Ad5 left arm homology | 3558–4441 |
| right inverted terminal repeat | 4442–4544 |
| pBR322 origin | 4752–5419 |
| kanamycin resistance ORF | 6228–7019 |
pShuttle-CMV-C-Flag质粒的图谱如下：
pShuttle-CMV-C-FLag质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D8119 pShuttle-CMV-C-FLag.pdf。
pShuttle-CMV-C-FLag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-C-FLag)包括：
| Acc65 I | Afl II | Age I | Asc I | Asp718 |
| Blp I | BsiC I | BsiW I | BstB I | Bsu36 I |
| Cla I | Eco72 I | EcoN I | Esp I | Fse I |
| Kpn I | Nru I | Pml I | Pvu I | Sfi I |
pShuttle-CMV-C-FLag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-C-FLag once)包括：
| BsrG I | T`GTAC,A | 193 | Hpa I | GTT|AAC | 1155 |
| SnaB | ITAC|GTA | 679 | PflM I | CCAN,NNN`NTGG | 1933 |
| Nhe I | G`CTAG,C | 940 | BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 2372 |
| Not I | GC`GGCC,GC | 945 | Bbs I | GAAGAC 8/12 | 3174 |
| BamH I | G`GATC,C | 952 | Bbv II | GAAGAC 7/11 | 3175 |
| Hind III | A`AGCT,T | 958 | Bst1107 I | GTA|TAC | 3528 |
| EcoR V | GAT|ATC | 966 | Xca I | GTA|TAC | 3528 |
| Sal I | G`TCGA,C | 970 | Pme I | CTTT|AAAC | 3549 |
| Mlu I | A`CGCG,T | 976 | EcoR I | G`AATT,C | 3554 |
| Bgl II | A`GATC,T | 982 | Avr II | C`CTAG,G | 4096 |
| PaeR7 I | C`TCGA,G | 988 | BspH I | T`CATG,A | 5492 |
| Xho I | C`TCGA,G | 988 | Psp1406 I | AA`CG,TT | 5891 |
| Xba I | T`CTAG,A | 994 | Rsr II | CG`GWC,CG | 6897 |
| Spe I | A`CTAG,T | 1033 | Dra III | CAC,NNN`GTG | 7244 |
| Sca I | AGT|ACT | 1038 | Xmn I | GAANN|NNTTC | 7498 |
pShuttle-CMV-C-FLag质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´
Reverse primer (1047-1069): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3´
pShuttle-CMV-C-FLag 的全序列信息:pShuttle-CMV-C-FLag.txt。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8119-1µg | pShuttle-CMV-C-Flag | 1μg |
| D8119-100µg | pShuttle-CMV-C-Flag | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.pShuttle-CMV-C-FLag质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，插入目的基因时注意与FLag不能发生移码突变。携带目的基因的质粒经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经已经预转了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中进行同源重组。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒
