产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
pShuttle-CMV-C-DsRed (腺病毒质粒, 红色荧光)是自行研发的用于构建表达C端DsRed(红色荧光蛋白)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后，需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。
pShuttle-CMV-C-DsRed质粒可以用于在包装成腺病毒后表达C端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个DsRed的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测DsRed。
本质粒为卡那霉素抗性。
重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。
pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经预转化了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。
目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。
pShuttle-CMV-C-DsRed主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| left inverted terminal repeat | 1–103 |
| encapsidation signal (ES) | 183–331 |
| CMV promoter | 341–933 |
| multiple cloning site | 940–988 |
| DsRed | 993-1670 |
| SV40 polyA | 1690–1901 |
| Ad5 right arm homology | 1906–4160 |
| Ad5 left arm homology | 4208–5091 |
| right inverted terminal repeat | 4192–5194 |
| pBR322 origin | 5402–6069 |
| kanamycin resistance ORF | 6878–7669 |
pShuttle-CMV-C-DsRed 质粒(8155bp)的图谱如下：
pShuttle-CMV-C-DsRed质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D8115 pShuttle-CMV-C-DsRed.pdf。
pShuttle-CMV-C-DsRed 中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-C-DsRed)包括：
| Acc65I | Afl II | Age I | Asc I | Asp718 |
| Blp I | BsiC I | BsiW I | BstB I | Bsu36 I |
| Cla I | Eco72 I | EcoN I | Esp I | Fse I |
| Kpn I | Nru I | Pml I | Pvu I | Sfi I |
pShuttle-CMV-C-DsRed 中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-C-DsRed once)包括：
| SnaB I | TAC|GTA | 679 | Sca I | AGT|ACT | 1683 |
| Nhe I | G`CTAG,C | 940 | Hpa I | GTT|AAC | 1800 |
| Not I | GC`GGCC,GC | 945 | BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 3017 |
| BamH I | G`GATC,C | 952 | Bst1107 I | GTA|TAC | 4173 |
| Hind III | A`AGCT,T | 958 | Xca I | GTA|TAC | 4173 |
| EcoR V | GAT|ATC | 966 | Pme I | CTTT|AAAC | 4194 |
| Sal I | G`TCGA,C | 970 | EcoR I | G`AATT,C | 4199 |
| Mlu I | A`CGCG,T | 976 | Avr II | C`CTAG,G | 4741 |
| PaeR7 I | C`TCGA,G | 988 | BspH I | T`CATG,A | 6137 |
| Xho I | C`TCGA,G | 988 | Psp1406 I | AA`CG,TT | 6536 |
| Stu I | AGG|CCT | 1204 | Rsr II | CG`GWC,CG | 7542 |
| Xba I | T`CTAG,A | 1672 | Xmn I | GAANN |NNTTC | 8143 |
| Spe I | A`CTAG,T | 1678 |
pShuttle-CMV-C-DsRed 质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´
Reverse primer (1692-1714): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3´
pShuttle-CMV-C-DsRed的全序列信息:pShuttle-CMV-C-DsRed2.txt。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8115-1µg | pShuttle-CMV-C-DsRed | 1μg |
| D8115-100μg | pShuttle-CMV-C-DsRed | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.pShuttle-CMV-C-DsRed质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，插入目的基因时注意与DsRed不能发生移码突变。携带目的基因的质粒经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经已经预转了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中进行同源重组。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。
