产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用绿色荧光蛋白)是自行研发的植物(如拟南芥等)原生质体表达质粒，可以作为原生质体瞬时转染的阳性对照质粒或通过构建EGFP融合蛋白而实现观察目的蛋白的亚细胞定位的目的。EGFP序列的N端有多个限制性酶切位点，根据阅读框在此插入目的基因就可以表达C端含有EGFP标签的融合蛋白，利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位；EGFP序列的C端有2X Flag标签(DYKDDDDKDYKDDDDK)，可以在融合蛋白质粒转染原生质体后实现Western Blot检查融合蛋白表达水平的目的。质粒为氨苄青霉素抗性。
p35SPPDK promoter-EGFP-Flag载体中EGFP基因由35SPPDK强启动子驱动表达。35SPPDK强启动子由花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)启动子与玉米C4PPDK启动子融合而成，可以高效启动目的蛋白在植物细胞中的表达。
p35SPPDK-EGFP-Flag载体仅保植物留瞬时转染所需元件，为避免由于载体过大导致原生质体转染效率降低而采用精简的载体结构。此载体不可用于植物稳定遗传株系的构建。
p35SPPDK-EGFP-Flag采用来自农杆菌的胭脂碱合酶基因的终止子(nopaline synthase terminator，NOS-T)，用于终止RNA聚合酶转录，对目的基因的表达进行调控。
p35SPPDK-EGFP-Flag质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| M13 forward primer(M13 fwd) | 1-17 |
| 35SPPDK promoter | 84-593 |
| EGFP | 617-1333 |
| 2X Flag-tag | 1355-1402 |
| NOS terminator | 1411-1663 |
| M13 reverse primer(M13 rev) | 1702-1718 |
| lac operator | 1726-1742 |
| lac promoter | 1750-1780 |
| CAP binding site | 1795-1816 |
| pUC origin | 2104-2692 |
| Ampicililin resistance ORF | 2863-3723 |
| Ampicililin promoter | 3724-3828 |
p35SPPDK-EGFP-Flag质粒(4301bp)的图谱如下：
p35SPPDK-EGFP-Flag的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用绿色荧光蛋白).pdf
p35SPPDK-EGFP-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut p35SPPDK-EGFP-Flag包括：
| AccI | AfeI | AgeI | AscI | AsiSI | AvrII | BbvCI |
| BclI | BfuAI | BglII | BlpI | BmtI | BsiWI | BspDI |
| BspMI | BstBI | BstEII | BstXI | BstZ17I | Bsu36I | ClaI |
| DraIII | EagI | EcoNI | FseI | HincII | HpaI | MfeI |
| MluI | MscI | NaeI | NgoMIV | NheI | NotI | NruI |
| PacI | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PsiI |
| PspXI | RsrII | SacII | SalI | SbfI | SexAI | SfiI |
| SgrAI | SmaI | SnaBI | SphI | SrfI | SwaI | TspMI |
| Tth111I | XcmI | XmaI |
p35SPPDK-EGFP-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut p35SPPDK-EGFP- Flag once)包括：
| AatII | G,ACGT`C | 3858 | EcoRV | GAT|ATC | 337 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 611 | KasI | G`GCGC,C | 4158 |
| AflII | A`CRYG,T | 1440 | KpnI | G,GTAC`C | 616 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2936 | NarI | GG`CG,CC | 4159 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2459 | NcoI | C`CATG,G | 616 |
| ApaI | G,GGCC`C | 396 | NdeI | CA`TA,TG | 4108 |
| ApoI | R`AATT,Y | 1687 | NsiI | A,TGCA`T | 1531 |
| AvaI | C`YCGR,G | 26 | PaeR7I | C`TCGA,G | 26 |
| BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 598 | PluTI | G,GCGC`C | 4162 |
| BamHI | G`GATC,C | 597 | PshAI | GACNN|NNGTC | 245 |
| BmgBI | CAC|GTC | 308 | PspOMI | G`GGCC,C | 392 |
| BsaAI | YAC|GTR | 556 | PstI | C,TGCA`G | 1411 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 1474 | SacI | G,AGCT`C | 523 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 2997 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 |
| BsmI | G`AATG,CN` | 437 | ScaI | AGT|ACT | 3417 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 26 | SfoI | GGC|GCC | 4160 |
| BspEI | T`CCGG,A | 527 | SpeI | A`CTAG,T | 1335 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 | SspI | AAT|ATT | 3740 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1326 | StuI | AGG|CCT | 1349 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4105 | StyI | C`CWWG,G | 615 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 300 | XbaI | T`CTAG,A | 603 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 525 | XhoI | C`TCGA,G | 27 |
| EcoO109I | RG`GNC,CY | 3912 | ZraI | GAC|GTC | 3856 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1688 |
p35SPPDK-EGFP-Flag质粒可使用的测序引物序列如下：
35SPPDK forward primer(473-494): 5’-CCTTTTCGCTGTACTCTCTCGC-3’
EGFP reverse primer(670-689): 5’-CGTTTACGTCGCCGTCCAG-3’
p35SPPDK-EGFP-Flag的全序列信息：D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag.txt
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2627-1µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 1μg |
| D2627-100µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.首次使用1 µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.100 µg包装的本产品质粒浓度为0.1 µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切。用于植物原生质体转化需进行质粒大量抽提。
