产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
pLenti-H1是一种自行研发的使用特别便捷的用于表达小RNA并同时表达绿色荧光蛋白GFP的重组慢病毒载体。该载体可以用于表达siRNA (small interference RNA)，也称RNAi (RNA interference)，或用于表达microRNA等其它小RNA。一方面，该载体可用于和pCMV-VSVG质粒(D8215)及pCAG-dR8.9(delta8.9,Δ8.9)(D8216)共同转染HEK-293T细胞以包装慢病毒；另一方面，也可单独用于直接转染细胞，用于表达siRNA、miRNA等小RNA。
pLenti-H1含有H1启动子，适合驱动小RNA的表达。同时pLenti-H1含有CMV启动子驱动表达的绿色荧光蛋白基因GFP。直接转染哺乳动物细胞后或者包装好的病毒感染哺乳动物细胞后，CMV启动子能高效启动绿色荧光蛋白GFP的表达，可以方便地通过观察绿色荧光来确定转染或感染效率，从而来推测目的小RNA的表达情况。
慢病毒(Lentivirus)是以 HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的病毒载体系统。它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列或小RNA)导入动物或人的原代细胞或细胞系。慢病毒的宿主范围广，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。pLenti-H1作为慢病毒载体删除了病毒绝大部分的致病基因，保留了包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列长末端重复序列（LTR），并对HIV的5’LTR进行改造，换成CMV启动子，同时对3’LTR进行了缺失突变,使病毒载体失去了自我复制能力，安全性大大提升。pLenti-H1中还加入了WRE元件，能够显著提高外源基因的表达。
pLenti-H1使用特别便捷，本载体通常仅须酶切1小时，无须酶切过夜，即可切胶回用于质粒构建。本载体由于BamH I和Xho I酶切位点之间预插入了一段长1008 bp的片段，从而可以通过电泳来区分单酶切和双酶切的片段，所以pLenti-H1用BamH I和Xho I通常双酶切1小时即可电泳切胶回收目的片段用于后续的连接反应，无需酶切过夜，这样可以显著缩短构建质粒所需的时间。目的小RNA的DNA序列合成并退火后可以直接连接入在BamH I和Xho I酶切位点之间。构建好的能表达目的小RNA的pLenti-H1质粒与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G(VSVG)(D8215)和pCAG-dR8.9(也称为delta8.9或Δ8.9)(D8216)共同转染到HEK-293T细胞中完成慢病毒的包装，就可以制备获得高滴度、自我复制缺陷并且能表达小RNA的重组慢病毒。
pLenti-H1为氨苄青霉素抗性。
pLenti-H1质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 254-817 |
| 5’LTR | 818-1016 |
| Psi | 1066-1203 |
| FLA P | 2447-2570 |
| H1 promoter | 2662-2759 |
| Inserted DNA fragment | 2766-3774 |
| Lox P | 3835-3868 |
| CMV | 3918-4520 |
| GFP | 4536-5254 |
| Lox P | 5275-5308 |
| WRE | 5364-5952 |
| 3’SIN-LTR | 6160-6662 |
| pUC | 6664-7337 |
| Ampr | 7482-8342 |
pLenti-H1质粒(8475bp)的图谱如下：
pLenti-H1插入片段附近的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D8202 pLenti-H1(慢病毒小RNA表达载体,绿色荧光).pdf
pLenti-H1中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pLenti-H1)包括：
| AscI | AvrII | BsiCI | BsiWI | BsmBI | Bst1107I | BstBI |
| BstEII | BstXI | Eco72I | HpaI | PmeI | PmlI | PspAI |
| RsrII | SfiI | SmaI | SphI | SplI | SrfI | StuI |
| Tth111I | XcaI | XcmI | XmaI |
pLenti-H1中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pLenti-H1 once)包括：
| MluI | A`CGCG,T | 232 | BlpI | GC`TNA,GC | 3727 |
| SpeI | A`CTAG,T | 253 | EspI | GC`TNA,GC | 3727 |
| BssHII | G`CGCG,C | 1093 | MscI | TGG|CCA | 3754 |
| SapI | GCTCTTC 8/11 | 1484 | PaeR7I | C`TCGA,G | 3776 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 1532 | XhoI | C`TCGA,G | 3776 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 1554 | BspMI | ACCTGC 10/14 | 3810 |
| BsmI | GAATG,C 7 | 1978 | NotI | GC`GGCC,GC | 3891 |
| PstI | C,TGCA`G | 2421 | NsiI | A,TGCA`T | 3923 |
| XbaI | T`CTAG,A | 2617 | NheI | G`CTAG,C | 4515 |
| BamHI | G`GATC,C | 2761 | AgeI | A`CCGG,T | 4524 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 3220 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 5606 |
| BclI | T`GATC,A | 3353 | SacII | CC,GC`GG | 5868 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 6087 | BspMII | T`CCGG,A | 6469 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 6091 | DrdI | GACNN,NN`NNGTC | 6771 |
| Asp718 | G`GTAC,C | 6091 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 7556 |
| KpnI | G,GTAC`C | 6095 | SspI | AAT|ATT | 8360 |
pLenti-H1质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
H1 primer (2678–2697): 5´TCGCTATGTGTTCTGGGAAA 3´
pLenti-H1的全序列信息：pLenti-H1序列信息.txt
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8202-1µg | pLenti-H1 | 1µg |
| D8202-100µg | pLenti-H1 | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
