产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 200?l | ￥ 240 | 200 |
BL21(DE3)pLysS甘油菌，是收集生长在对数期的BL21(DE3)pLysS菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒，特别适合于影响细菌生存和活力的外源毒性蛋白的IPTG诱导表达。
BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重组表达蛋白的降解，所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。
BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子(T7 promoter)调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的，因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。
BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，可以表达能降解T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达，即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制。因此本菌株特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。
BL21(DE3)pLysS菌株基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm (DE3) pLysS (CamR)
BL21(DE3)pLysS菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用质粒小量抽提试剂盒(通用型) (D0007S或D0007M)、质粒中量抽提试剂盒(通用型) (D0020)或质粒大量抽提试剂盒(通用型) (D0028)进行质粒抽提。
本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。 包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D0339 | BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白诱导表达用) | 200μl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。-80℃可以长期保存。
注意事项：
使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 划平板接种：
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
a. 用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板(含有20µg/ml氯霉素)接近平行的角度，在LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200µl塑料枪头，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b. 用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，在LB平板(含有50µg/ml氯霉素)上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养：
a.取出BL21(DE3)pLysS甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml LB(含有20µg/ml氯霉素)的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积LB(含有20µg/ml氯霉素)的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备
可以使用一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)、超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)或其它方法进行感受态细胞
