pCMV-jGCaMP7b （高亮度钙离子荧光探针）-上海雅吉生物科技有限公司

pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是用于钙离子(Ca2+)荧光检测的哺乳动物细胞表达质粒，表达的是经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这个钙离子探针(calcium probe)中，环状排列的绿色荧光蛋白(circularly permuted green fluorescent protein, cpGFP)一端和钙调蛋白(calmodulin, CaM)融合表达，另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。这样当钙离子结合钙调蛋白时，可以改变钙调蛋白的构象，同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象，钙调蛋白和M13的构象改变最终导致GFP的构象改变，从而影响其荧光的强弱，最终实现对于钙离子浓度变化的检测。

图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。

pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是最新一代基因编码的钙离子探针系列，适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测，并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。

jGCaMP7系列的四个融合蛋白与GCaMP6系列相比，各有其突出特点：高亮度钙离子荧光探针jGCaMP7b (brighter baseline fluorescence)有更亮的本底荧光，并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍，未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%；高对比度钙离子荧光探针jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)有高对比度低和更低的背景荧光，并且灵敏度是GCaMP6s的2.7倍，对比度显著增强；快速响应型钙离子荧光探针jGCaMP7f (fast kinetics)具有快速动力学特点，反应速率是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍，更加适合检测钙离子的动态变化；高灵敏度钙离子荧光探针jGCaMP7s (sensitive and slow) 具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点，灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上，并且响应速率也比GCaMP6s快。

pCMV-jGCaMP7系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的。四个融合蛋白对应的突变氨基酸序列参考表1。

表1：jGCaMP7突变位点

	M13	Linker1		cpGFP	Linker2	CaM
jGCaMP7s	A52V					A317L
jGCaMP7f				H78K		A317L		R381T	T383S	G392R
jGCaMP7b				H78K	L302P	A317L	M374Y
jGCaMP7c		L59Q	E60P	H78K			M378G	K379S	T383S	T412N

jGCamP7b中的突变主要发生在cpGFP(H78K)、Linker2(L302P)和CaM(A317L/M374Y)上。pCMV-jGCaMP7b质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，该质粒为卡那霉素抗性。

pCMV- jGCaMP7b质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
jGCaMP7b	693-2045
T7 promoter and T7 primer binding site	2107-2128
SV40 polyA signal	2140-2523
f1 origin of ss-DNA replication	2661-2965
bla promoter	2990-3114
SV40 promoter	3134-3427
Neomycin/kanamycin resistance ORF	3507-4298
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	4299-4757
pUC origin	4886-5553

pCMV- jGCaMP7b质粒(5605bp)的图谱如下：

pCMV-jGCaMP7b质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2861 pCMV-jGCamP7b.pdf。

pCMV-jGCaMP7b中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-jGCaMP7b)包括：

AclI	AfeI	AgeI	AhdI	AscI	AsiSI	BaeI
BbsI	BbvCI	BglII	BsiWI	BsmBI	BspEI	BssHII
BstEII	BstZ17I	EcoNI	EcoRI	EcoRV	Esp3I	FseI
HindIII	NruI	PflMI	PmeI	PpuMI	PshAI	PspXI
SbfI	ScaI	SgrAI	SwaI	XcmI	XmnI

pCMV-jGCaMP7b中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-jGCaMP7b once）包括：

AccI	GT`MK,AC	799	PflFI	GACN`N,NGTC	3735
AflII	C`TTAA,G	1536	PluTI	G,GCGC`C	3638
ApaI	G,GGCC`C	2062	PmlI	CAC\|GTG	1919
ApaLI	G`TGCA,C	5239	PspOMI	G`GGCC,C	2058
BamHI	G`GATC,C	687	PstI	C,TGCA`G	1744
BcgI	NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN	735	PvuI	CG,AT`CG	2140
BlpI	GC`TNAGC	858	RsrII	CG`GWC,CG	4151
BmgBI	CAC\|GTC	810	SacII	CC,GC`GG	662
Bpu10I	CC`TNA,GC	1029	SalI	G`TCGA,C	798
BsaXI	,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	2687	SapI	GCTCTTCN`NNN,	1609
BspQI	GCTCTTCN`NNN,	1609	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3410
CspCI	,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	382	SfoI	GGC\|GCC	3636
DraIII	CAC,NNN`GTG	2753	SmaI	CCC\|GGG	682
KasI	G`GCGC,C	3634	SnaBI	TAC\|GTA	342
MfeI	C`AATT,G	2837	SpeI	A`CTAG,T	2052
MluI	A`CGCG,T	2523	SrfI	GCCC\|GGGC	682
MscI	TGG\|CCA	3717	StuI	AGG\|CCT	3456
NarI	GG`CG,CC	3635	TspMI	C`CCGG,G	680
NdeI	CA`TA,TG	240	Tth111I	GACN`N,NGTC	3753
NotI	GC`GGCC,GC	668	XbaI	T`CTAG,A	2046
PaeR7I	CTCGAG	867	XhoI	C`TCGA,G	867
PciI	A`CATG,T	5553	XmaI	C`CCGG,G	680

pCMV-jGCaMP7b的全序列信息:D2861PCMV-jGCaMP7b序列.txt

pCMV-jGCaMP7b质粒转染Hela细胞12h后，于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果请参考图2本产品网站上的视频。

图2. pCMV-jGCaMP7b质粒转染Hela细胞12h后2μM Ionomycin处理前后的荧光变化效果图。pCMV-jGCaMP7b质粒转染培养在六孔板中的Hela细胞12h后，先用PBS洗涤细胞2-3次，加入1ml DMEM，选择适当视野，在荧光显微镜下拍摄视频。开始拍摄5-10秒后，加入1ml含有4μM Ionomycin的新鲜DMEM培养液(最终浓度为2μM Ionomycin)，继续拍摄视频约2-3分钟。图中可见加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱，加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强，时间较长后荧光又会逐渐变弱。A. 未加Ionomycin；B. 加入Ionomycin 30s；C：加入Ionomycin 60s；D：加入Ionomycin 120s。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D2861-1µg	pCMV-jGCaMP7b(高亮度钙离子荧光探针)	1µg
D2861-100µg	pCMV-jGCaMP7b(高亮度钙离子荧光探针)	100µg
—	说明书	1份