产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His是研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有His标签(HHHHHHHH)人血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme2，ACE2)的胞外N端肽酶结构域(peptidase domain，PD) 1-615位的氨基酸所组成的蛋白，可以方便使抗His标签的抗体来识别ACE2(1-615)蛋白的表达，免疫共沉淀分析或者蛋白纯化等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。
ACE2是肾素-血管紧张素系统(Rennin-angiotension system，RAS)的重要成员。血管紧张素(Angiotensin II，Ang II)是RAS系统的主要效应分子，具有促进内皮细胞凋亡和促进炎症因子表达的作用。ACE2主要是通过降解血管紧张素II生成血管紧张素1-7(angiotensin-(1-7))从而发挥机体保护功能。ACE2是在肺、心脏、肾脏和肠中表达的I型膜蛋白，其胞外域包括N端肽酶结构域(Peptidase domain，PD)及C端Collectrin-like结构域(CLD)。ACE2是SARS冠状病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人类呼吸道冠状病毒NL63的受体。SARS-CoV/SARS-CoV-2通过其Spike蛋白受体结合域(Receptor binding domain，RBD)与ACE2的肽酶结构域结合，参与病毒的感染过程。SARS-CoV-2 Spike蛋白与ACE2的亲和力是SARS-CoV Spike蛋白与ACE2的亲和力的10-20倍。
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 232-819 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 863-882 |
| Multiple cloning site | 895-922 |
| ACE2(1-615) | 923-2767 |
| His-tag | 2768-2791 |
| BGH pA | 2838-3062 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 3108-3536 |
| SV40 promoter | 3541-3884 |
| Neomycin resistance ORF | 3946-4740 |
| SV40 polyA signal | 4914-5044 |
| pUC origin | 5427-6097 |
| Ampicillin resistance ORF | 6242-7238 |
| bla promoter | 7137-7143 |
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒(7238bp)的图谱如下：
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的多克隆位点的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His.pdf
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His)包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 917 | NruI | TCG|CGA | 208 |
| AflII | C`TTAA,G | 908 | PaeR7I | C`TCGA,G | 2795 |
| ApaI | G,GGCC`C | 2811 | PflFI | GACN`N,NGTC | 4192 |
| AvrII | C`CTAG,G | 3864 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1965 |
| BamHI | G`GATC,C | 1992 | PluTI | G,GCGC`C | 4077 |
| BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 6820 | PshAI | GACNN|NNGTC | 2751 |
| BmtI | G,CTAG`C | 899 | PspOMI | G`GGCC,C | 2807 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 3933 | PspXI | VC`TCGA,GB | 2795 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4471 | PvuI | CG,AT`CG | 6685 |
| BstBI | TT`CG,AA | 4756 | RsrII | CG`GWC,CG | 4590 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 5046 | SacI | G,AGCT`C | 818 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 626 | SacII | CC,GC`GG | 1579 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 3341 | SfoI | GGC|GCC | 4075 |
| EagI | C`GGCC,G | 3980 | SmaI | CCC|GGG | 3887 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 816 | SnaBI | TAC|GTA | 590 |
| EcoRI | G`AATT,C | 2722 | SpeI | A`CTAG,T | 249 |
| KasI | G`GCGC,C | 4073 | TspMI | C`CCGG,G | 3885 |
| KpnI | G,GTAC`C | 921 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 4192 |
| MluI | A`CGCG,T | 228 | XbaI | T`CTAG,A | 2801 |
| MscI | TGG|CCA | 4156 | XhoI | C`TCGA,G | 2795 |
| NarI | GG`CG,CC | 4074 | XmaI | C`CCGG,G | 3885 |
| NheI | G`CTAG,C | 895 |
pcDNA3.1-ACE2(1-615)质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'
BGH pA primer (2832-2849): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His的全序列信息：D2951 pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His序列.txt。
pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His质粒转染HEK293T细胞后的表达效果请参考图1:
图1：Western blot实验检测SARS-CoV-2 ACE2(1-615)基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒；2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His质粒。使用碧Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-ACE2(1-615)-His质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞，37℃恒温培养48h后，弃掉孔内培养液，PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解，4℃离心，取上清用BCA法测蛋白浓度，然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳，每孔蛋白总量20µg，转膜、封闭后使用1:1000稀释的His抗体(AH367)室温孵育1h，洗涤后1:1000稀释的辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(A0216)室温孵育1h，最后经BeyoECL Star(P0018AS)化学发光，并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2951-1μg | pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His | 1μg |
| D2951-100μg | pcDNA3.1-ACE2(1-615)-His | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
