动物RNA提取试剂盒（动物RNAout）（TRIzol）-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
50T	￥ 980	200

产品及特点	本产品是类似于 TRIzol、基于异硫氰酸胍/酚/氯仿提取原理的快速总 RNA 提取试剂，可用于从各种动物组织（包括白细胞）和部分植物材料中快速提取总 RNA。 1. 操作简单快速，只要 10 分钟左右，可以全在室温下进行。 2. RNA 质量高，OD260/OD280 一般在 1.9 左右。一般不含用 RT-PCR 可以检测到的基因组DNA 污染。 3. 适用于大部分实验材料，如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。植物 RNA 的提取最好使用天泽基因的植物 RNAOUT。 4. 性价比高于进口TRIzol 和 TRI Reagent 等同类产品。
规格及成分		成份	编号	小立盒包装
		动物 RNAout	3070A	100 mL（广口棕色玻璃瓶）
		使用手册	3070sc	1 份
运输及保存	常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂	氯仿、异丙醇、75%乙醇、RNase-free 水。
使用方法	注意：下面的操作步骤是用 1 mL 本产品进行的微量提取的，细胞使用量一定要准确，不能超过下述用量，否则将超出本产品的裂解能力，RNA 产量将急剧降低。如果样品量大，请按比例增加各成份的用量。RNA 工作环境最好用高效无毒的固相 RNase 清除剂（CAT#：3080）彻底处理。 1. 对贴壁细胞（10 平方厘米）：吸尽培养液，加入 1 mL 的本产品用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。 2. 对悬浮细胞（五百万至一千万个）：离心收集细胞，吸尽液体，加入 1 mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。 3. 对新鲜组织（50-100 mg）：将新鲜组织剪切成小块，放入 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中，加入 1 mL 的本产品，用 Polytron 剪切式匀浆器冰上匀浆 30 秒左右，将匀浆液转移至新的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），使用量不要超过 30-50 mg，否则十分容易产生 DNA 污染。对 10 mg 以下的组织，最好加入本公司的微量 RNA 助沉剂。

4. 对 RNALOCKER 保存的组织（50-100 mg）：先用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块，其余操作同第 3 步。RNALOCKER 处理后的组织韧性很强，匀浆时间需要适当延长。

5. 对液氮中保存的组织（50-100 mg）：在研钵中研磨成粉，加入 1 mL

本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的

1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。

6. 在装有裂解物/匀浆物的 1.5 mL 塑料离心管中加入0.2 mL 自备氯仿，振荡器上充分振荡混均 30 秒。注意：一定要把官底的溶液震荡起来，否则只是液面的振动。

7. 13000-15000 g 室温离心 3 分钟。

8. 将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层有机相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 50-100uL 上清液不取。

9. 对脂类丰富的组织（如脂肪组织和脑组织），需再重复氯仿抽提一到两次以让氯仿充分去除脂类分子。

10. 在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡 30 秒混匀。

11. 13000-15000 g 室温离心 5 分钟，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如果组织使用量低于 10 mg 或需要提高 RNA 回收率，可以将离心时间延长到 20 或 30 分钟。

12. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。

13. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 75%乙醇，振荡混匀 30 秒。

14. 13000-15000 g 室温离心 1 分钟。

15. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。

16. 重复第 13-15 的洗涤步骤一次（也可以省略）。

17. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 uL)。注意不要吸弃 RNA 沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA 的后续使用。

18. 室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 uL RNase-free 水使RNA 沉淀溶解。千万不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。RNA 样品可以立即使用或存放于-80℃待用。

注意：由于 RNase-free 水没有主动灭活残留 RNase 的功能，而任何方法提取的 RNA 都可能有残留的 RNase，所以强烈建议客户使用本公司推出的具有主动灭活残留 RNase 功能的、同时跟后续 RT-PCR 等反

应兼容的液相 RNase 清除剂（CAT#：3091）。

附一：RNA 完整性的电泳检测（仅供参考，本产品不含相关试剂）

如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28： 414，2000）。如果是简单检测，可以使用 TAE 缓冲液或超快核酸电泳液进行常规电泳，但文献报道必须使用 RNAon 这样的变性上样液

（BioTechniques，9：558，1990）。普通 DNA 上样液不含变性剂，也没经过去 RNase 处理，所以最好不要使用，否则 RNA 容易降解。

动物 RNA 电泳后应该在 UV 下呈现三条清晰的 rRNA 带，28S rRNA 条带的荧光强度一般比 18S rRNA 条带的荧光强度强 1.5-2.3 倍。如果这两条 rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解（因为大的 RNA 被酶降解的可能更大）。

跟动物一样，植物果实和种子的 RNA 一般有三条电泳带，但植物叶片的 RNA 有四条或更多rRNA 带，多余的 RNA 来源于叶绿体。

如果电泳发现 RNA 样品中有 DNA 污染（一般是使用过多样品造成），可分别用天泽基因的非酶DNA 清除剂或 RNase-free DNase 清除。

附二：RNA 产量和纯度测定（仅供参考，本产品不含相关试剂）

用 pH 在 7.5-8.2 的 TE 缓冲液将 5-10 μL RNA 稀释 10-20 倍后在 OD260 和 OD260 测光吸收，通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA 的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，一般来说，代谢旺盛的组织(如肝脏和肾脏)RNA 的产率高，代谢不旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA 的产率低，下面是常见动物组织 RNA 产率: