产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 产品及特点 | 柱式植物RNA提取试剂盒（柱式植物RNAout）（不含DNA酶）是基因植物 RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升级产品，它结合了植物 RNAOUT 的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNAOUT 产品介绍的附录)和天泽基因柱式纯化系列产品的快捷性。该产品特点如下： 1. 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟，比植物 RNAOUT 快一倍。 2. RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。 3. 适用于所有用植物 RNAOUT 能提出 RNA 的植物(注:对有些植物可能需要在溶液 A 中额外添加 RVC)。 4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。 5. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。 6. 由于小 RNA 太短很难上柱，故如果要提取小 RNA 需要用本公司专门的试剂盒。 | ||||
| 规格及成分 |
| 成 份 | 编 号 | 大纸盒包装 |
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| 柱式植物 RNA 提取溶液 A | 71203a | 50 mL | |||
| 柱式植物 RNA 提取溶液 B | 71203b | 15 mL | |||
| 柱式植物 RNA 提取溶液 C | 71203c | 50 mL | |||
| 离心吸附柱 | 60911 | 50 套 | |||
| 通用洗柱液 | 60408 | 50 mL | |||
| RNA 洗脱液 | 71207 | 10 mL | |||
| 使用手册 | 71203sc | 1 份 | |||
| 注：溶液 B 为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液 B 有油粒状颗 粒及分层，属正常现象，不影响使用。 | |||||
| 运输及保存 | 常温运输和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。 | ||||
| 自备试剂 | 氯仿。 | ||||
| 使用方法 | 1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物叶片、或 50-100 mg 植物种子、或 200-500 mg 植物果实。 2. 样品破碎： 1) 匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物组织需用纸吸去RNALOCKER 液体后再剪切成小块)，放入 10-15 mL 塑料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀 | ||||
浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2) 液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑料离心管中，加入 1 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 A，立即剧烈振荡20 秒，充分混匀。
液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液会多于 1 mL，转移时也只取 1 mL。
4. 在离心管中加入 0.3 mL 的柱式植物 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 μL 上清液不取。
7. 加入等体积的柱式植物 RNA 提取溶液 C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产
生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀） 转移到离心吸附柱中， 13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中， 13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第 7 步加入柱式植物 RNA 提取溶液 C 后有沉淀产生，则需要洗三
次，每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。
11. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 μL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
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| 13. 13000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。 14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子 （BioTechniques，28：414，2000）。如果电泳发现 DNA 污染严重（跟 样品相关）建议使用含有 RNase-free DNase 处理步骤的柱式植物RNAout 2.0 （ CAT#:90404 ）， 也可以另购膜结合 DNA 清除剂 （CAT#90904）升级成柱式植物 RNAout 2.0。 15. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260 的RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。 16. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。 |
| 关联产品 | 柱式植物 RNAout 2.0（CAT#:90404）、膜结合 DNA 清除剂（CAT#90904） |
