产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
产品特点：
由于粪便中有机质含量丰富，对 RT-PCR 等后续反应有极大的抑制作用，
所以从粪便中提取高纯度的 RNA 一直是十分棘手的问题。本产品是在天泽基
因粪便 RNAout 基础上开发的柱式粪便 RNA 提取产品，
柱式粪便RNA提取试剂盒（柱式粪便RNAout）具有下列特点：
1. 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右。
3. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便 RNA 提取产品。
5. 试剂无毒无害, 环保。
运输及保存 常温运输和保存，溶液 B 长期保存需要放 4℃，
有效期一年。 自备试剂 氯仿。
使用方法：
1. 称取 0.5-1 g 粪便放入到含液氮的研钵中，迅速将冻成固体的粪便研磨成
粉末后。
2. 将粉末转移到 5-15mL 的塑料离心管中（不能使用玻璃离心管），加入 1
mL 65℃预热的溶液 A，立即剧烈振荡 20 秒，充分混匀。
3. 将匀浆物转移至干净的 1.5mL 塑料离心管中。
4. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B（溶液 B 用前需要摇匀，呈浑浊状）和
0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊
状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5. 室温 13000 g 离心 3 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机
相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下
100 uL 上清液不取。
7. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生，千万不要去掉沉
淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中，13000g
室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中，
13000g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加 0.3 mL 通用
洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
11. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱
液，室温放置 1-2 分钟。
13. 13000g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用
或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的电泳检测：由于粪便 RNA 含有肠道上皮细胞和肠道细菌的
RNA，它们的分子量大小不一，所以电泳时不会形成清晰的条带。
15. RNA产量产率测定：通过OD260的光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260
的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA
产量/粪便的用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之
间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分
别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
