1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后充分混匀，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料
2. 称取 0.1-0.3 g 的粪便，加入到含预热溶液 A 的离心管中，震荡器上剧烈震荡
3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。
4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈
5. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀，溶液将呈白色或
6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。
7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新的 1.5 mL 离心管中，上清
液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在 0.7 mL 左右。
注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第 10 步，但 DNA 的
产量会低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步，则转移的
溶液体积不要超过 0.6 mL，否则没有空间加溶液 C。
8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底
的溶液震荡起来。
9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心
后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。将
0.5 mL 上清转移到新的 1.5 mL 离心管中。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入 0.8 mL 的溶液 C，上下颠倒 30 秒混匀。
11. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温
离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000
g 室温离心半分钟，弃穿透液）。
12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃
穿透液。
13. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g
室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的 DNA 的纯度稍有
提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液
会污染 DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50-100 uL DNA 洗
脱液 2.0。
16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。
17. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 DNA 样品，可以立即使
用或存放于冰箱待用。
