1. 本产品可用于病毒 RNA、病毒 DNA 提取以及 DNA 和 RNA 双提取。
2. 操作简单,整个过程只需要 20 分钟左右。
3. 灵敏度高,通过 PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 30-50 拷贝/mL。
4. 安全无毒,不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5. 与 PCR 和荧光 PCR 兼容。所得 DNA 可用于 PCR、酶切等实验;RNA 可用于RT-PCR 和 Northern 杂交等实验。
6. 价廉物美,性价比远高于国外同类产品。
7. 适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
1. 对于液体病毒样品:在 1.5 mL 离心管中加入 0.1-0.2 mL 液体病毒样品。如
果病毒需要富集,可以将 1.5 mL 液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟,移
弃1.3 mL 后剩下的 0.2 mL 用于第 2 步处理。
对于拭子样品:将一个拭子放入离心管中,加入 1mL 自备的生理盐水,振荡器
上充分振荡半分钟后转移 0.2 mL 到 1.5 mL 塑料离心管中,用于第 2 步处理。
2. 加入 0.6 mL 溶液 A 到第一步得到的 0.2 mL 样品中,振荡 30 秒混匀后室温
放置 10 分钟。注意:溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在
65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中,颠倒混匀后转移一半的混合液(0.8mL)
到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集
管中。
5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤 3 的离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收
集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1 分钟,弃
收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。
9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 RNase-free 的 1.5 mL 离心管中,在
离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 μL 洗脱液,然后室温放置 2 分钟。
10. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,离心管中的溶液即为病毒 DNA 和 RNA 溶液。
11. 所得溶液可以直接用于 PCR、RT-PCR 等实验,也可放-20℃长期保存备用。
疑难解答:
Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存,每个病毒最多
只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子,每种 RNA 有很多拷贝),同时
其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很
多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作
中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测 OD 检
测,只能通过 PCR 或 RT-PCR 检测,而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化,所
以要确定提取是否成功十分不容易。