产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
无酚无氯仿柱式植物 RNAOUT是在柱式植物RNAOUT（CAT#：71203）的基础上经过配方和流
程优化得到的无氯仿升级产品，它结合了植物RNAout的高效性、快捷性以
及无氯仿处理的安全性。该产品特点如下：
1. 免酚和氯仿处理，操作安全可靠。
2. 简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能够有效去除
大 多数植物中的多糖污染。
4. 目前已测试过上百种植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交和cDNA合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物 RNA 提取产品。
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物叶片、或
30-50mg 植物种子、或 100-200mg 植物果实。不能多加，否则容易堵
柱。无氯仿提取处理的量比常规的加氯仿处理量要少一倍，否则非常容易
堵柱，但是否堵柱又取决于植物组织的多糖多酚的浓度。
2. 样品破碎：
1) 匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物
组织需用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块)，放入 10-15 mL
塑料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀
浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2) 液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入
含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑
料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，立即剧烈振荡 20 秒，充分混匀。
注意：如果不小心将溶液 A 放置在 4℃，则可能会产生沉淀，使用前
必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转
移非液体的细胞碎片)。有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液
会多于 1 mL，转移时也只取 1 mL。
4. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，管底沉淀为细胞破碎物。
5. 将上清液(约 1 mL)转移到另一干净的 2 mL 塑料离心管中。
6. 加入等体积的溶液 B，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属
于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 将 0.7mL 的混合溶液转移到离心吸附柱中，g 室温离心 3
到 5 分钟，弃穿透液。如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透，可以延长
离心时间直到彻底穿透。
8. 将剩下的混合溶液按每次 0.7mL 的方式转移到同一离心吸附柱中， 每次
g 室温离心 3-5 分钟，弃穿透液。
9. 由于混合液有 2mL 左右，所以三次转移即可将混合液全部挂柱。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温 g 离心半分钟，弃穿透液。
如果离心吸附柱里面有残留液体没穿透，可以延长离心时间直到彻底穿
透。
11. 再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温 g 离心半分钟，弃穿透液。
12. 12000 rpm 室温离心 10 秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留
的乙醇会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱
液，室温放置 1-2 分钟。
14. g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立
即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用
甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子
（BioTechniques，28：414，2000）。
16. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之
间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260
的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA
产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之
间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分
别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
