| 传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 |
| 细胞描述 | STR鉴定正确 这株细胞源自胸水。没有病毒颗粒。亚显微结构特征包括微丝和桥粒，肝糖原颗粒，大溶酶体，成束的细胞质纤丝。SK-BR-3细胞株过表达HER2/c-erb-2基因产物。 倍增时间：48-72 hours 致瘤性：Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma. 受体表达情况：Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18 保藏机构：ATCC; HTB-30 DSMZ; ACC-736 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
| 培养备注 | 1. SK-BR-3细胞从冷冻保存中恢复的速度可能很慢。SK-BR-3细胞在低温保存恢复过程中的附着会很轻。这很正常。这种细胞系在培养的整个第一周以及每次继代培养后都表现出松散的附着和漂浮的细胞，这并不少见； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生长的第一周，在启动复苏后几天内保持细胞不受干扰。如果仍然有很多漂浮物，用台盼蓝检查生存能力。通过轻轻离心保留漂浮细胞，并在更换培养基时将其与附着的细胞一起添加回同一培养容器中，这一点很重要。不要分离或丢弃漂浮细胞。细胞最初以小斑块或细胞群的形式附着，许多细胞团仍处于悬浮状态。几天后，生长将从贴壁细胞群向外延伸。通常也会出现一些细胞碎片。漂浮细胞应始终通过温和离心（125xg，持续5-7min）保留，并在换液或传代后放回培养容器； 3. SK-BR-3细胞倾向于相互堆积。在细胞达到70-80%汇合度之前不要用胰酶消化处理细胞。如果让细胞过度生长，细胞就会分离漂浮。 |
细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
3、细胞冻存：（注：非无血清冻存液方法，无血清冻存液方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。
