产品及特点
嗜肺巴斯德杆菌PCR试剂盒可用于检测嗜肺巴斯德杆菌.嗜肺巴斯德杆菌（Pasteurella pneumophila）在自 然界中分布广泛,它有两种生物型,主要感染啮齿类动物,对实验小鼠 大鼠和豚鼠的危 害较大.嗜肺巴斯德杆菌作为一种条件致病菌,能够引起免疫缺陷动物或免疫功能低下的 动物产生严重的肺炎,并可能导致动物死亡.本产品是根据 PCR 原理开发的嗜肺巴斯德 杆菌检测试剂盒,它具有下列特点：
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板.
2. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品.
3. 产品精心优化且特异性高,引物是根据嗜肺巴斯德杆菌 DNA 高度保守区设计, 不会跟除此之外的其它生物样本 DNA 发生交叉反应.
4. PCR mix 中含上样染料,扩增反应后可以直接上样电泳.
5. 嗜肺巴斯德杆菌PCR试剂盒足够 50 次 20μL 体系的PCR 反应.
6. 本产品只能用于定性实验,不能用于定量.
7. 本产品只能用于科研.
成分规格
| 产品组成 | 编号 | 规格 |
| 2×Taq PCR Master Mix | GZ020101 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 嗜肺巴斯德杆菌 PCR 引物混合液 | GZ01345668yw | 60 μL |
| 嗜肺巴斯德杆菌 PCR 阳性对照 （1×10E5 拷贝/μL） |
GZ01345668pc |
50 μL |
保存条件
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年.阳性对照需要单独放置,不要污染其他试 剂.
使用方法
一 DNA 提取（样本制备区）
1. （选做）如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取反应,多出的两个中一个是 PC （样品制备阳性对照）,一个是 NC（样品制备阴性对照）.可以用 10μL 嗜肺巴斯德杆菌 PCR 阳性对照（1×10E5 拷贝/μL,本试剂盒提供）再加上一定量的水作为制备的阳性对 照（加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）.可以用水 作为制备的阴性对照.
2. 用自选方法提取纯化样品 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼 容.建议使用细菌基因组 DNA 提取试剂盒（Cat: GZ01201-50）提取 DNA.
二 试剂配制（试剂准备区）
准备足量的 PCR 管（样品管 阴性对照管 阳性对照管）,向各 PCR 管中分别加入 下列成分.
| 成分 | N 个 待检样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| 2×Taq PCR Master Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 嗜肺巴斯德杆菌 PCR 引物混合液 | 各 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| DEPC-H2O | 7 μL | 7 μL | 7 μL |
转移至模板添加区.
三 添加模板（模板添加区）
向 PCR 管中分别加入 2uL 模板,顺序为阴性对照（DEPC-H2O） 待测样品模板 嗜肺巴斯德杆菌 PCR 阳性对照,离心 30 秒,立即进行扩增反应.
四 扩增反应（扩增及产物分析区）
将 PCR 管放置在 PCR 扩增仪器样品槽相应位置,进行扩增,扩增程序如下：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min |
|
PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 55℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 15 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min |
五 电泳检测
取 5-10 μL PCR 产物.电泳检测 PCR 产物.本产品提供的 2×Taq PCR Master Mix 含 染料,在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer.
嗜肺巴斯德杆菌PCR试剂盒样本检测结果：凝胶电泳图谱中有 374-377bp 条带,表明该样本含有嗜肺巴斯德杆 菌,结果为阳性；无 374-377bp 条带,该样本不含嗜肺巴斯德杆菌,结果为阴性.
