无论新人还是老手,在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况.那对于细胞污染,最重要的是预防,因为细胞一旦污染,想救是非常困难的,即便救活,细胞状态也会变差,进而影响实验结果,所以先来讲讲如何预防
 

　　无论新人还是老手,在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况.那对于人源细胞或鼠源细胞的污染,最重要的是预防,因为细胞一旦污染,想救是非常困难的,即便救活,细胞状态也会变差,进而影响实验结果,所以先来讲讲如何预防.生物安全柜是细胞处理的主要场所,而培养箱是细胞生长的主要场所,所以细胞污染通常就发生在这两个地方.那么在使用生物安全柜和培养箱时如何做好预防措施呢？
首先,所有进入安全柜的东西都要尽可能保证无菌.如果实验室条件允许,那直接购买商品化的试剂和耗材是最稳妥的,例如Gibco Hyclone的试剂,Eppendorf Corning的耗材,这些大品牌的试剂和耗材一般只要是正品都可以保证无菌.如果试剂需要自己用干粉配制,那么在配制中需要严格按无菌操作进行.另外每次试剂配制量不宜过多,比如完全培养基建议以一到两周内用完为宜.试剂在分装时可以考虑再用针头式过滤器过滤一次,减少污染的可能性.如果所用移液器吸头是散装的,则注意在将吸头装入吸头盒时需要带手套,因为灭菌时无法完全去除吸头上可能粘附的油脂和其他杂质.
其次,安全柜每次使用前需要紫外照射30min灭菌,然后通风5min以上保证换气到位.每次处理细胞前应将实验需要的各种试剂 耗材备齐,尽量减少细胞处理过程中的来回走动.安全柜内的东西尽量摆放有序,具体可以根据个人使用习惯而定,如果你使用的是公用安全柜,则可能需要使用前临时调整.以个人为例,移液器和吸头盒放右手边,实验中常用试剂放右前方,废液缸放左前方,并保证和试剂有一定安全距离,右角放置培养皿,左角放置其他耗材.大致原则是尽量保证最常用的东西靠右,次常用的东西靠左,右边操作区域为洁净区,左边操作区域为非洁净区,左撇则相反.
然后,实验过程中所有试剂不用时需要盖上瓶盖,瓶盖打开时除了干净的吸头,其他任何东西都不要从瓶口的上方经过.如果使用培养皿培养细胞,则处理时不要长时间打开皿盖.如果所用吸头没有滤芯,那在使用时注意不要将试剂倒吸入移液器,如果倒吸的是培养基,极易成为细菌生长的温床.一把有菌的移液器可以轻松污染所有使用其处理过的细胞,所以一旦发生倒吸,要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂,有条件的建议使用带滤芯的吸头.由于使用安全柜的过程中手和前臂都要进入安全柜,所以有条件的可以准备一件细胞房专用无尘服,使用前装入布袋消毒后烘干,在细胞房中取出,非更换前不要穿出细胞房.没有条件的则可以准备一副袖套,每次用完后放安全柜中紫外消毒.无论是否穿戴无尘服或者袖套,实验过程中只要手出了安全柜,再进入前都需要用75%的酒精消毒.
最后,如果使用培养皿培养细胞,放入培养箱前摇匀时要轻柔,不要将培养基摇到皿盖和皿身的间隙中,这样在细胞生长时很容易污染.如果使用瓶盖没有气孔的细胞瓶培养细胞,放入培养箱前需要将瓶盖拧松半圈左右,保证瓶内外可以进行气体交换,注意不要拧太松,这样在细胞生长时也很容易污染,有条件的建议选择瓶盖有气孔的细胞瓶,这样放入培养箱前直接拧紧瓶盖即可.由于培养箱内的温度和湿度很高,所以最好定期用75%酒精擦拭培养箱消毒.培养箱里水槽中的水需要使用无菌水,不可以用自来水.

那么细胞如果还是不幸污染了又该怎么办呢？把细胞污染分为早期污染和晚期污染两种情况.早期污染是细胞状态变差,但依旧能保持生长,显微镜下未见明显微生物或可见少量微生物.这种情况的话我们在换液时可以多用PBS洗几次,然后加入适合的抗生素.早期污染只要发现及时,处理得当,救回来的可能性还是很大的.晚期污染则是细胞形态发生明显改变,细胞停止生长,显微镜下可见大量微生物.这时候建议大家及时清理掉相关细胞,以免污染其他细胞.在对安全柜和培养箱进行消毒后,再重新复苏早批次的细胞.细心的会发现,新细胞收到后,不应急于开展实验,而应该先小心培养,冻存一到两个批次的细胞后再开展实验,这样实验过程中如果细胞出现问题,可以有冻存细胞保证实验还能继续进行.