人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株（ASPC-1/GEM）_企业动态

人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株（ASPC-1/GEM）

细胞介绍

一个胰腺癌病人的腹水中的细胞移植到裸鼠后建立了这个细胞株.

细胞特性

1）来源：ASPC-1耐药筛选

2） 形态：上皮细胞样,贴壁生长

3） 含量：>1×10⁶细胞数

4） 用途：仅供科研使用

细胞运输保存及注意事项

	复苏细胞	冻存细胞
包装	充液的T25细胞培养瓶	1mL冻存管
运输条件	常温	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱	-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项	1. 收到细胞请先就培养瓶/冻存管的外观细胞的状态,进行拍照并保存,如有问题请及时联系我们； 2. 收到的复苏细胞,若有较多细胞飘起,可能由于运输导致.请先置于37℃细胞培养箱中静置2~4h,待细胞贴壁后再做处理； 3. 复苏细胞充液培养基为不含药物的维持培养基,收到细胞后请及时更换为完全培养基； 4. 建议收到细胞后,首先进行扩增,并冻存部分细胞以备用.

细胞耐药诱导过程

待细胞生长稳定后,开始倍增药物诱导剂量,每个剂量保持至细胞可以稳定生长至汇合度达50%以上.递增药物浓度依次为：0.03μg/mL 0.3μg/mL 1.5μg/mL 3μg/mL 6μg/mL 12μg/mL 18μg/mL.约10个月后,细胞可在18μg/mL GEM药物浓度下稳定生长,视为耐药细胞株构建成功,并命名为ASPC-1/GEM.

细胞培养试剂的配制

1）GEM药物的配制及保存

建议将GEM药物配制成18mg/mL的母液：即使用1mL DMSO溶液溶解18mg GEM药物,使其完全溶解.

注意：可根据用量配置药物,并将药物分装保存,避免反复冻融导致药物失效.溶解后的GEM,4℃保存1周,-20℃保存1个月,-80℃保存6个月.

2）冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO,现用现配.

3）完全培养基的配制（推荐使用h005-001b）

成分	体积/浓度
优质胎牛血清	10%
双抗	1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺	1%
GEM	0~18μg/mL
DMEM培养基	补充至所需体积

细胞培养条件

气相：空气,95%；二氧化碳,5%；温度：37℃,培养箱湿度为70%~80%.

细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm/min离心3~5min,弃去上清液.加入1mL完全培养基重悬细胞后,均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中,置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养.第二天显微镜下观察细胞生长情况,2~3day换液.

注意：①细胞复苏过程中,不可使用含有药物的培养基.须在细胞完全贴壁,形态完全展开,生长状态稳定后,方可根据实验需要添加GEM药物.若加药后细胞生长状态较为缓慢,可适当降低GEM的浓度,或使用不含GEM的完全培养基培养至细胞生长状态较好时,再更换为所需的GEM浓度；

②建议复苏细胞时始终穿戴防护手套和面罩,避免冻存管因温差较大而发生爆炸,造成人员伤害.

2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养.

②弃去培养上清,用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1次,吸净残余的PBS.

③加入适当体积的0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶-1mL,其它培养器皿可覆盖培养底面即可）,置于37℃培养箱中消化2~5min,显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落,即可轻拍培养瓶使细胞全部脱落.迅速拿回操作台,加入2倍体积的含10%FBS的培养基中止消化.