人莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用.

                                                                        96T

 

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清 血浆及相关液体样本中莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）表达.

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）表达.用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）,与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）的存在与否.

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	阳性对照	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×8条	9	阴性对照	0.5ml×1瓶
4	样品稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性.

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔 阳性对照2孔 空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴 阳性对照孔中加入阴性对照 阳性对照50μl.然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟.   

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.

7. 温育：操作同3.

8. 洗涤：操作同5.

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl,终止反应（此时蓝色立转黄色）.

11. 测定：以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）. 测定应在加终止液后15分钟以内进行.

 

计算和结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20

  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）阴性

  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为莱姆病抗体IgM（Lyme-IgM）阳性.

注意事项

1．操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用.

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.

3．浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.

4． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

5．底物请避光保存.

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7．所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全.

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃.

2．有效期：6个月