全新推出热启动Bst4.2系列——LAMP扩增检测进入新的高度！_企业动态

基于自身分子酶进化技术平台（In silico Design & in vitro Evolution Workflow）,并持续聚焦LAMP恒温扩增技术,全新升级的Bst4.2系列,将LAMP扩增技术推入了新的高度.热启动Bst4.2系列在保持Bst4.0 通扩的能力的基础上,全系包含热启动Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>95%,在>60℃时1min内酶活完全释放.现阶段,热启动HotStart Bst4.2 Polymerase为已知的LAMP扩增最佳用酶,与普通LAMP扩增体系相比它有绝对的优势.

	反应温度提升至70℃,引物配对更加严谨,粗样本的核酸释放更加充分.
	四引物扩增体系性能和速度堪比六引物体系,使得引物筛选难度降低.
	Helicaser的加入使得反应无需F3/B3引物,FIP/BIP引物浓度也可进一步降低.
	高亲和力的Aptamer使得反应体系易于建立,并维持均一的扩增性能.
	基于Bst4.2的HNB变色反应颜色对比更加明显,且保留了其对样品和缓冲液的高耐受性.
	建立了基于链置换的Probe-LAMP方法,只需改造一条环引物.

实例性能展示

1 Bst 4.2热启动性能展示
采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看.HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性.

2 以Bst 4.2 SYBR Green试剂进行标准LAMP和eLAMP扩增比较
以human Total RNA为模板,采用RnaseP LAMP Primer进行标准LAMP和eLAMP 扩增.在25ul扩增体系中加入10ng 1ng和0ng的RNA,70℃反应40min.从扩增结果可获得,在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除,对扩增速度几乎无影响,并且非特异性扩增得到改善. 6 Primer LAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM. 4 Primer eLAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM.

3 以Bst 4.2 Basic试剂进行DP-eLAMP探针法扩增
在众多的探针法LAMP测试中,DP-LAMP探针法（Displaceable Probe LAMP）为推荐的使用方法（参考PMID: 33626039）.在LAMP扩增中将LF或LB引物退火至互补的猝灭oligo,利用链置换活性获得游离的荧光信号（可参考3831-21说明书资料）.该方案可进一步降低LAMP的非特异扩增.下图为DP-eLAMP进行三种荧光标记探针的实验数据.结果显示HotStart Bst4.2总能获得高特异性和高重复性的扩增.

4 以Bst4.2 L-HNB 试剂进行L-HNB （紫罗兰-淡绿）变色反应（肉眼观察）
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对10000 1000 100 25copies/管的阳性RNA进行检测,ddH20为阴性对照（4重复）.下图为70℃反应30min 后的检测结果.结果表明L-HNB法获得清晰易于区分的颜色变化,极易区分阳性和阴性扩增.

5 以Bst4.2 L-HNB （紫罗兰-淡绿）变色反应对反应缓冲盐Tris的耐受性测试
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对1000copies/管的阳性RNA进行检测（2重复）,ddH20为阴性对照（2重复）.下图为70℃反应30min 后的检测结果.结果表明L-HNB法,在1x浓度下可耐受10mM Tris-HCl的缓冲盐,阳性样本仍然可以充分的变色.该变色方法不受样本中缓冲盐影响.