一 细胞培养条件
| 细胞英文 | BA/F3 | 细胞中文 | 小鼠原B细胞株 |
| 培养体系 | 1640+10FBS加10ng/ml IL-3 气相：空气,95%；二氧化碳,5%. 温度：37℃,培养箱湿度为70%-80% | ||
| 传代方法 | 1:2-1:4 | 传代情况 | 2天换液 |
| 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO | 生长特性 | 悬浮生长 |
| 规格 | 1x106 (T25瓶或1mL冻存管) | 支原体检测 | 阴性 |
| 细胞形态 | 圆形 | 细胞来源 | 小鼠淋巴 |
| 备注 | 收集瓶中培养基,过渡使用. | ||
二 细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法.收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时.镜下观察：未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液收集至离心管中,加入6ml完全培养基,放入37℃ 5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤.（注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
三 细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀.在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀.然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中）,培养过夜.第二天换液并检查细胞密度.
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养.
1 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法：
悬浮瓶装细胞不开封,先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净,镜检细胞状态.若状态良好,请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2小时后拿出,瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒 过火,将整瓶细胞悬液分别离心（1000rmp 5min）后收集于离心管中,视其离心后的细胞量进行放回培养或分离培养.（以上仅为悬浮细胞处理方法）.PS：若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存.若密度超过80%,可直接进行传代（方法同上）.
一 收到细胞处理方法
1. 收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态.接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100×,200×各一张）,观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况.作为我方进行售后的依据.
2. 收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费重发一次细胞.
3. 由于细胞状态受环境 操作和运输等多方面因素的影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后是需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后与客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天.
4. 如客户对细胞的种类 纯度 活性等特性有疑问,需提供相应的生物学实验检测结果作为依据.
二 细胞出现问题,可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失 瓶身破损 培养液严重漏液等,重发；
2. 细胞污染问题,请在收到产品48小时内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后,绝大多数细胞未存活,（需提供真实清晰的细胞状态照片）,重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封,出现污染,重发；
5. 细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,核实后予重发；
6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照,3天未告知的,视为产品合格.4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的,并跟技术人员沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发.技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发.
三 细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些？
1. 客户造成细胞污染,不重发；
2. 客户不正确操作致细胞状态不好,不重发；
3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发；
4. 细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发；
5. 细胞培养时经其它处理的,不重发；
6. 细胞收到2天内,未告知,不重发；
7. 视具体情况而定.
注意：若对细胞鉴定存在争议,可以在收到细胞3个月内提供真实有效的STR检测证明,本公司承诺无条件退还细胞款项,其他情况本公司将不予受理. 小鼠原B细胞株BA/F3培养说明书
