1. 细胞背景
CAD 细胞系是一种来源于小鼠中枢神经系统的神经元样细胞系，最初由 Cath.a 细胞系通过基因工程改造获得。CAD 细胞具有神经元特性，能够表达多种神经元标志物（如微管相关蛋白 MAP2 和神经丝蛋白），并且在特定条件下可以分化为具有神经元形态的细胞。CAD 细胞广泛应用于神经科学研究，包括神经递质释放、神经元分化及神经退行性疾病机制的研究。
2. 细胞保藏机构
CAD 细胞系由多个国际细胞库保藏，主要包括：
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ATCC（美国典型培养物保藏中心）：提供详细的细胞背景信息及培养指南。
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DSMZ（德国微生物和细胞培养物保藏中心）：提供细胞系及相关技术支持。
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中国科学院细胞库：国内常用的细胞资源库，提供 CAD 细胞系及鉴定报告。
3. 细胞复苏、培养及冻存步骤
3.1 培养基配制
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基础培养基：DMEM/F12（1:1）。
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补充物：
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10% 胎牛血清（FBS）
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1% 青霉素-链霉素（100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素）
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1% 非必需氨基酸（NEAA）
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完全培养基：将上述成分混合均匀，使用 0.22 µm 滤膜过滤除菌，4℃ 保存备用。
3.2 细胞复苏
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从液氮罐中取出冻存的 CAD 细胞，迅速放入 37℃ 水浴中解冻。
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将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，加入 5 mL 预热的完全培养基，轻轻混匀。
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1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用适量完全培养基重悬细胞，接种至培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。
3.3 细胞传代
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当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。
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弃去旧培养基，用 PBS 清洗细胞一次。
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加入 0.25% 胰酶-EDTA 溶液，37℃ 消化 1-2 分钟。
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加入完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞至单细胞悬液。
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1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用完全培养基重悬细胞，按 1:3 至 1:5 的比例接种至新培养瓶中。
3.4 细胞冻存
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收集对数生长期的细胞，按传代方法制备单细胞悬液。
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1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至 1×10⁶/mL。
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分装至冻存管中，标记细胞名称、日期及代次。
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采用程序降温法冻存细胞：4℃ 30 分钟，-20℃ 2 小时，-80℃ 过夜，最后转移至液氮中长期保存。
4. 注意事项
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细胞培养过程中需严格无菌操作，避免污染。
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定期检查细胞状态，确保培养基无浑浊或 pH 异常。
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细胞传代时避免过度消化，以免影响细胞活力。
5. 售后服务
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售后政策：自收到细胞之日起 1 个月内，若因细胞质量问题（如污染、活力不足等）导致实验失败，可申请免费补发一次。
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申请流程：提供细胞批次号、实验记录及相关证明，联系供应商客服进行处理。
通过以上方法，可有效培养 CAD 小鼠神经元细胞，为神经科学研究提供可靠的实验材料。
