1. 细胞来源背景
C166细胞系来源于小鼠胚胎的血管内皮细胞，广泛应用于血管生物学、肿瘤血管生成及药物筛选等研究领域。该细胞系具有典型的内皮细胞特征，如表达血管内皮标志物（如CD31、vWF等），并能形成血管样结构，是研究血管生成、内皮细胞功能及相关疾病的重要工具。
2. 细胞保藏机构
C166细胞系由多个国际和国内细胞库保藏，具体包括：
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ATCC（美国典型培养物保藏中心）：提供详细的细胞背景信息及培养指南。
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中国科学院细胞库：国内常用的细胞资源库，提供C166细胞系及相关技术支持。
3. 细胞培养方法
3.1 培养基配制
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基础培养基：DMEM（高糖）或RPMI-1640。
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补充物：
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10%胎牛血清（FBS）
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1%青霉素-链霉素（100 U/mL青霉素和100 µg/mL链霉素）
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1%非必需氨基酸（NEAA）
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完全培养基：将上述成分混合均匀，使用0.22 µm滤膜过滤除菌，4℃保存备用。
3.2 细胞复苏
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从液氮罐中取出冻存的C166细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。
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将细胞悬液转移至15 mL离心管中，加入5 mL预热的完全培养基，轻轻混匀。
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1000 rpm离心5分钟，弃上清。
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用适量完全培养基重悬细胞，接种至培养瓶中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。
3.3 细胞传代
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当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。
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弃去旧培养基，用PBS清洗细胞一次。
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加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟。
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加入完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞至单细胞悬液。
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1000 rpm离心5分钟，弃上清。
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用完全培养基重悬细胞，按1:3至1:5的比例接种至新培养瓶中。
3.4 细胞冻存
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收集对数生长期的细胞，按传代方法制备单细胞悬液。
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1000 rpm离心5分钟，弃上清。
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用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至1×10⁶/mL。
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分装至冻存管中，标记细胞名称、日期及代次。
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采用程序降温法冻存细胞：4℃ 30分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜，最后转移至液氮中长期保存。
4. 注意事项
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细胞培养过程中需严格无菌操作，避免污染。
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定期检查细胞状态，确保培养基无浑浊或pH异常。
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细胞传代时避免过度消化，以免影响细胞活力。
5. 售后服务
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售后政策：自收到细胞之日起1个月内，若因细胞质量问题（如污染、活力不足等）导致实验失败，可申请免费补发一次。
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申请流程：提供细胞批次号、实验记录及相关证明，联系供应商客服进行处理。
通过以上方法，可有效培养C166小鼠血管内皮细胞，为相关研究提供可靠的实验材料。
