细胞培养条件
| 培养条件 | 空气，95%；CO2，5% ；37℃ | ||
| 生长特性 | 贴壁生长 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
| 培养体系 | DMEM+10%FBS+1%P/S | ||
| 传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 传代情况 | 2天换液 |
| 备注 | 天气寒冷可能会导致细胞冷缩脱落，如脱落较多，参考下列（四、注意事项），如脱落不多正常操作即可。瓶中完培可收集使用。 | ||
细胞背景
BCECs（Brain Capillary Endothelial Cells，小鼠脑毛细血管内皮细胞）是构成血脑屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）的主要细胞类型之一。血脑屏障是大脑与血液循环系统之间的重要生理屏障，能够选择性阻止某些物质进入脑组织，从而保护中枢神经系统的稳定性和功能。BCECs在维持血脑屏障的完整性、调节物质运输以及参与炎症反应等方面具有重要作用。
BCECs广泛应用于血脑屏障的体外模型构建、药物通透性研究、神经炎症机制研究以及脑部疾病的药物筛选等领域。由于其独特的生理功能，BCECs在神经科学和药物研发中具有重要的研究价值。
2. 细胞培养方法
2.1 培养基配制
BCECs通常使用内皮细胞专用培养基（如DMEM/F12培养基），并添加以下成分：
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10% 胎牛血清（FBS）
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1% 青霉素/链霉素（P/S）
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1% 内皮细胞生长因子（如VEGF或bFGF）
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1% 非必需氨基酸（NEAA）
2.2 培养条件
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培养温度：37°C
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CO₂浓度：5%
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湿度：95%
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细胞接种密度：建议1×10⁴~5×10⁴ cells/cm²
2.3 传代步骤
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吸除旧培养基，用PBS轻柔洗涤细胞2次。
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加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37°C消化1-2分钟。
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加入完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞至单细胞悬液。
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离心（1000 rpm，5分钟），弃上清，重悬细胞。
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按1:2~1:3的比例接种到新的培养瓶中。
3. 复苏与冻存步骤
3.1 细胞复苏
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从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中，轻轻摇晃至完全解冻（约1-2分钟）。
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将细胞悬液转移至15 mL离心管中，加入5 mL预热的完全培养基。
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离心（1000 rpm，5分钟），弃上清，重悬细胞。
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将细胞接种到培养瓶中，加入适量完全培养基，放入培养箱中培养。
3.2 细胞冻存
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收集对数生长期的细胞，按照传代步骤制备单细胞悬液。
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离心（1000 rpm，5分钟），弃上清。
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用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至1×10⁶~5×10⁶ cells/mL。
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将细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。
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采用程序降温法冻存细胞：4°C 30分钟 → -20°C 2小时 → -80°C过夜 → 液氮长期保存。
4. 细胞鉴定情况
BCECs的鉴定通常通过以下方法进行：
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形态学观察：BCECs呈典型的鹅卵石样排列，细胞形态为多边形或梭形。
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免疫荧光染色：检测内皮细胞特异性标志物，如CD31（PECAM-1）、vWF（von Willebrand Factor）和Glut-1（葡萄糖转运蛋白1）。
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功能鉴定：通过跨内皮电阻（TEER）测定和荧光标记物（如FITC-dextran）通透性实验评估血脑屏障功能。
5. 售后服务
我们承诺为客户提供高质量的BCECs细胞及相关技术支持。在细胞发货后一个月内，如果出现以下问题，我们将免费重新发货一次：
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细胞污染（需提供清晰的污染图片和说明）。
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细胞活率低于80%（需提供细胞计数和活率检测结果）。
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细胞鉴定结果不符合标准（需提供详细的实验数据和图片）。
请客户在收到细胞后及时检查细胞状态，并在使用过程中严格按照操作指南进行培养和实验。如有任何问题，请及时联系我们的技术支持团队。
6. 总结
BCECs小鼠脑毛细血管内皮细胞是研究血脑屏障功能和神经疾病机制的重要工具细胞。通过规范的培养、复苏、冻存和鉴定方法，可以确保细胞的稳定性和实验结果的可靠性。我们致力于为客户提供优质的细胞产品和完善的售后服务，助力您的科研工作顺利进行。
如有进一步问题或需求，请随时联系我们！
