一、细胞背景
A-72细胞是一种犬源癌细胞系，来源于犬的软组织肉瘤。该细胞系具有上皮细胞样形态，贴壁生长，广泛应用于肿瘤生物学研究、药物筛选以及癌症治疗方法的开发。A-72细胞在兽医学和比较肿瘤学研究中具有重要价值，尤其是在犬类癌症模型的建立和抗肿瘤药物测试中。
二、保藏机构
A-72细胞系由多个生物资源中心保藏和分发，例如：
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ATCC（美国典型培养物保藏中心）
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DSMZ（德国微生物和细胞培养物保藏中心）
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中国科学院细胞库
三、常温细胞的复苏、传代和冻存方法
1. 常温细胞的复苏
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从液氮中取出冻存的A-72细胞，迅速放入37°C水浴中解冻。将细胞悬液转移至15 mL离心管中，加入5 mL预热的完全培养基（DMEM + 10% FBS + 1% Penicillin-Streptomycin）。
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轻轻混匀，1000 rpm离心5分钟，弃上清。用新鲜培养基重悬细胞，转移至T25培养瓶中，置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。
2. 细胞传代
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当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。
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弃去旧培养基，用PBS洗涤细胞一次。
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加入1 mL 0.25%胰蛋白酶（含EDTA），37°C消化1-2分钟。
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加入完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。
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将细胞悬液转移至离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃上清。
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用新鲜培养基重悬细胞，按1:3至1:5的比例分装至新的培养瓶中。
3. 细胞冻存
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收集对数生长期的细胞，1000 rpm离心5分钟，弃上清。
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用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁶ cells/mL。
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分装至冻存管中，逐步降温至-80°C，24小时后转移至液氮中长期保存。
四、细胞鉴定
为确保细胞系的正确性，需进行以下鉴定：
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形态学鉴定：
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A-72细胞呈上皮细胞样，贴壁生长，细胞形态为多边形或梭形。
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免疫荧光染色：
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检测上皮细胞标志物（如角蛋白）的表达。
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STR profiling：
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通过短串联重复序列（STR）分析，确认细胞系的特异性。
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功能鉴定：
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通过体内外实验验证细胞的成瘤性和药物敏感性。
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五、注意事项
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培养基：
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使用DMEM培养基，添加10% FBS和1% Penicillin-Streptomycin。
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培养基需定期更换，避免营养耗尽。
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细胞密度：
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保持细胞融合度在80%-90%之间，避免过度生长导致细胞老化。
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无菌操作：
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所有操作需在无菌条件下进行，定期检测细胞是否有污染。
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细胞状态监测：
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定期观察细胞形态和生长状态，若发现异常（如细胞变圆、脱落等），及时排查原因。
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六、售后服务
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细胞质量问题：在收到细胞后1个月内，若发现细胞存在污染、死亡或其他质量问题，可联系技术支持，我们将免费重新发送一次细胞。
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技术支持：提供细胞培养、实验设计及结果分析的技术支持。
七、参考文献
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可根据具体实验需求，提供相关文献支持。
以上为A-72犬癌细胞的技术资料，供实验室参考使用。如有任何疑问，请及时联系技术支持或相关专家。
