1. 细胞背景

32D Clone 3细胞是一种小鼠骨髓来源的淋巴母细胞系，最初从C3H/HeJ小鼠的骨髓中分离得到。该细胞系依赖于IL-3（白细胞介素-3）的生长因子来维持其增殖和存活。32D Clone 3细胞常用于研究造血细胞分化、信号转导、细胞凋亡以及白血病等相关领域。由于其易于培养和对生长因子的依赖性，32D Clone 3细胞成为研究细胞因子信号通路和药物筛选的理想模型。

2. 细胞鉴定

• 物种来源：小鼠（Mus musculus）

• 组织来源：骨髓

• 细胞类型：淋巴母细胞

• 生长特性：悬浮生长

• 依赖因子：IL-3（白细胞介素-3）

• 鉴定方法：

  • 形态学鉴定：32D Clone 3细胞呈圆形或椭圆形，悬浮生长，细胞大小均匀。

  • 流式细胞术：通过表面标志物（如CD34、CD45）进行鉴定。

  • PCR检测：通过特异性引物检测小鼠基因序列，确认细胞来源。

  • 功能鉴定：通过IL-3依赖性生长实验，确认细胞对IL-3的依赖性。

3. 培养条件

• 培养基：RPMI 1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素（Penicillin-Streptomycin）和10 ng/mL小鼠重组IL-3。

• 培养温度：37°C，5% CO₂。

• 传代比例：根据细胞密度，通常每2-3天以1:3至1:5的比例传代。

• 细胞冻存：使用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）冻存细胞，储存于液氮中。

4. 注意事项

• IL-3依赖性：32D Clone 3细胞对IL-3高度依赖，培养基中必须含有足够浓度的IL-3（10 ng/mL），否则细胞会迅速进入凋亡状态。

• 细胞密度：保持细胞密度在2×10⁵至1×10⁶ cells/mL之间，避免细胞过度密集或过于稀疏，影响细胞生长状态。

• 无菌操作：所有操作需在无菌条件下进行，避免细胞污染。定期检测细胞培养物是否有细菌、真菌或支原体污染。

• 细胞状态监测：定期观察细胞形态和生长状态，若细胞出现异常（如形态改变、生长缓慢等），需及时排查原因。

• 冻存与复苏：冻存细胞时应使用合适的冻存液，并逐步降温至-80°C后再转移至液氮中。复苏时应迅速解冻，并立即转移至预热的培养基中。

5. 常见问题及解决方案

• 细胞生长缓慢：检查IL-3的浓度和活性，确保培养基新鲜且无污染。

• 细胞聚集：轻轻吹打细胞悬液，避免过度用力导致细胞损伤。若聚集严重，可使用细胞筛过滤。

• 细胞死亡增加：检查培养基的pH值、渗透压及IL-3的浓度，确保培养条件适宜。

6. 应用领域

• 信号通路研究：用于研究IL-3、GM-CSF等细胞因子介导的信号转导通路。

• 药物筛选：作为白血病药物筛选的模型细胞。

• 细胞凋亡研究：研究细胞凋亡机制及相关基因的功能。

7. 参考文献

• 可根据具体实验需求，提供相关文献支持。

• 8.售后情况：1个月以内有问题都可以免费再发一次

  以上为32D Clone 3小鼠骨髓淋巴母细胞的培养说明书，供实验室参考使用。如有任何疑问，请及时联系技术支持或相关专家。