BaF3细胞BCR-ABL-E255V基因过表达稳转株的构建
产品概述
本产品为BaF3细胞系中稳定表达BCR-ABL-E255V基因的稳转株。BCR-ABL融合基因是慢性髓性白血病（CML）的标志性突变，其中E255V突变与伊马替尼（Imatinib）等酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的耐药性相关。该稳转株可用于研究BCR-ABL-E255V突变在白血病发生、发展及耐药机制中的作用，以及筛选和评估新型靶向药物。
稳转株的转染筛选验证
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基因构建：
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使用慢病毒载体系统构建BCR-ABL-E255V基因表达载体，载体中包含筛选标记（如嘌呤霉素抗性基因）。
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通过测序验证BCR-ABL-E255V基因序列的正确性，确保突变位点（E255V）的准确性。
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细胞转染：
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将构建好的慢病毒载体转染至BaF3细胞中，采用高效转染试剂（如Lipofectamine 3000）或电穿孔法进行转染。
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转染后，细胞在37°C、5% CO₂的培养箱中培养24-48小时。
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筛选稳转株：
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转染后的细胞在含有嘌呤霉素（Puromycin）的培养基中进行筛选，持续7-10天，以去除未成功转染的细胞。
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通过有限稀释法筛选单克隆细胞株，确保获得高表达BCR-ABL-E255V的稳转株。
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验证稳转株：
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qPCR验证：检测BCR-ABL-E255V mRNA的表达水平，确认基因的稳定整合和表达。
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Western Blot验证：检测BCR-ABL-E255V蛋白的表达水平，确保蛋白的正确表达。
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功能验证：通过细胞增殖实验、药物敏感性实验（如伊马替尼处理）验证稳转株的功能特性。
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转导方法
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慢病毒包装：
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使用三质粒系统（包含包装质粒、包膜质粒和BCR-ABL-E255V表达质粒）在HEK293T细胞中包装慢病毒。
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收集病毒上清，通过超速离心浓缩病毒颗粒，测定病毒滴度。
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细胞转导：
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将BaF3细胞接种于6孔板中，密度为1×10⁵ cells/mL。
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加入适量慢病毒上清（MOI=10-20），同时加入Polybrene（终浓度8 μg/mL）以增强转导效率。
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37°C、5% CO₂培养24小时后，更换新鲜培养基。
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筛选与扩增：
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转导48小时后，加入嘌呤霉素（1-2 μg/mL）进行筛选，持续7-10天。
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筛选后的稳转株扩增培养，冻存备用。
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产品特点
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高表达：稳转株中BCR-ABL-E255V基因稳定高表达，适用于长期实验。
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功能验证：通过多种实验验证稳转株的功能特性，确保其适用于药物筛选和机制研究。
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高纯度：通过单克隆筛选，确保细胞株的均一性和稳定性。
应用领域
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药物筛选：用于筛选针对BCR-ABL-E255V突变的新型靶向药物。
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耐药机制研究：研究BCR-ABL-E255V突变介导的TKI耐药机制。
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信号通路研究：探讨BCR-ABL-E255V在白血病发生和发展中的作用。
储存与运输
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储存：液氮冻存，确保细胞活性。
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运输：干冰运输，提供详细的细胞培养和复苏指南。
注意事项
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使用前请仔细阅读产品说明书，确保正确的细胞培养和实验操作。
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本产品仅用于科研用途，不得用于临床诊断或治疗
