细胞基因敲除服务

Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service（CGKO）基因敲除细胞系服务是针对各种常用的细胞系，进行基因片段敲除的技术服务。主要提供：Cas9介导的大片段基因敲除（非移码）的方式导致细胞基因功能缺失，基因敲除可以将基因功能完全消除，比RNA干扰获得的数据更加确定，没有RNA干扰残留的基因功能背景的干扰，目前越来越成为主流的基因功能研究方式。使用Cas9X可以让你轻松靶向更高分的文章！

交付内容： 完全敲除单克隆2管(106cells/管)

交付周期： 5-10周交付

交付承诺： 提供单克隆, PCR和测序验证

 

活动时间： 2025年2月20日-3月31日

一、 技术原理

基因敲除（Gene Knockout）是指通过基因工程手段，使特定基因失去功能的技术。其基本原理是利用同源重组或基因编辑技术，将目标基因序列替换或插入外源序列，从而破坏基因的正常表达。

常用技术：

1. 同源重组法:

   • 构建含有与目标基因同源序列的打靶载体，载体中包含筛选标记（如新霉素抗性基因）和负筛选标记（如胸苷激酶基因）。

   • 将打靶载体导入细胞，通过同源重组将目标基因替换为打靶载体序列。利用筛选标记筛选出成功发生同源重组的细胞。

2. CRISPR/Cas9 系统:

   • 设计针对目标基因的向导RNA（sgRNA），引导Cas9核酸酶在特定位置切割DNA。

   • 细胞通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）修复断裂的DNA，可能导致基因插入或缺失，从而破坏基因功能。

二、 技术流程

以 CRISPR/Cas9 系统为例：

1. 目标基因选择与 sgRNA 设计:

   • 确定目标基因序列，设计特异性 sgRNA，避免脱靶效应。

2. CRISPR/Cas9 载体构建:

   • 将 sgRNA 和 Cas9 基因克隆到表达载体中。

3. 细胞转染:

   • 将 CRISPR/Cas9 载体导入目标细胞。

4. 阳性细胞筛选:

   • 利用抗生素筛选或流式细胞术筛选出成功转染的细胞。

5. 基因敲除效率验证:

   • 使用 T7E1 酶切、测序等方法检测基因敲除效率。

6. 细胞表型分析:

   • 观察基因敲除后细胞的形态、增殖、凋亡等表型变化。

三、 服务案例

案例：利用 CRISPR/Cas9 技术敲除 HEK293 细胞中的 GFP 基因

1. 服务内容:

   • 设计并合成针对 GFP 基因的 sgRNA。

   • 构建 CRISPR/Cas9-GFP 敲除载体。

   • 将载体转染至 HEK293 细胞。

   • 筛选阳性细胞并验证 GFP 基因敲除效率。

2. 服务结果:

   • 成功获得 GFP 基因敲除的 HEK293 细胞株。

   • 基因敲除效率达到 80% 以上。

   • 细胞形态和增殖能力无明显变化。

四、 总结

基因敲除技术是研究基因功能的重要工具，在生物医学研究、药物开发等领域具有广泛应用。随着基因编辑技术的不断发展，基因敲除技术将更加高效、精准，为生命科学研究提供更强大的工具。

服务优势:

 

• 经验丰富的技术团队

• 先进的实验设备

• 完善的质控体系

• 高效的项目管理