甲状旁腺是哺乳动物体内分泌腺之一，有两对，棕黄色，分别位于左右两叶甲状腺背面的中部和下部，其主要功能为分泌甲状旁腺激素，调节体内钙、磷的代谢。甲状旁腺功能减退症是指甲状旁腺激素分泌减少或功能障碍的一种临床综合症。
甲状旁腺细胞分离培养试验所需仪器设备及试剂
（1）仪器
| 仪器名称 |
| 生物安全柜 |
| CO2细胞培养箱 |
| 荧光倒置显微镜 |
| 高速冷冻离心机 |
| 电热恒温鼓风干燥箱 |
| 电热恒温震荡水槽 |
（2）试剂耗材
| 试剂名称 |
| T25细胞培养瓶 |
| 血球计数板 |
| 细胞培养孔板 |
| 上皮细胞培养体系 |
| 0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA） |
| 胶原酶Ⅰ( Collagenase Ⅰ) |
| 胶原酶Ⅳ( Collagenase Ⅳ ) |
2．大鼠甲状旁腺细胞的分离培养的步骤：
1、首先将4-6周的SD大鼠进行麻醉，在无菌条件下，取下甲状旁腺组织，然后放入75%酒精中浸泡3-5分钟。
2、然后在体视显微镜下仔细去除包膜、血管及结缔组织等杂质。
3、将剩下组织清洗并剪碎。
4、将剪碎的组织置于0.1% 胶原酶Ⅰ与胶原酶 Ⅳ中消化1-2小时。
5、终止消化后，过100μm滤网。
6、收集滤液后，300g离心5分钟。
7、重悬沉淀，铺瓶。
3、免疫荧光鉴定的步骤
（1）细胞爬片
取3片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。
（2）固定
细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗1遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。
（3）破膜封闭
将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，
玻璃片封闭液配置：0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合，再加10% 血清，
取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。
（4）一抗孵育
一抗配制：抗体与PBS 1:100（200）稀释
破膜封闭后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），将玻片（有细胞的一面）盖上置于4℃（最多可放置一周）
（5）二抗孵育
室温避光孵育二抗（二抗:PBS=1:500）2h后，PBS洗3×5min/次，染DAPI（DAPI:PBS=1:1000）5min，PBS洗3×5min/次。
（6）包埋
玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。
鉴定的细胞为P1代细胞
4、检验结果：
（一）细胞免疫荧光鉴定照片：
（二）检验基本情况：
经免疫荧光鉴定，该细胞纯度达到90%以上。
