亲爱的科研工作者，感谢您信任雅吉生物，我们致力于为大家分享质优价适的质粒，受 各种因素影响，我们只保证质粒的关键序列测序正确，不能保证实验效果。请您收到质粒后
请务必先转化，再挑取单菌落扩增，不要直接使用。如果您需要即用的大包装质粒或病毒颗
粒，可委托我们制备，性价比更高。
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的
抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20 度，90 天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直
接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先 5000rpm 离心 1min，再加入 20μl ddH2O 去离子水溶解质粒；
②取 1 支 100μl 感受态于冰上解冻 10min，加入 2μl 质粒，再冰浴 30min 后，42℃热激
60s，不要搅动，再冰浴 2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入 900μl 无抗的 LB 液体培养基，180rpm 震荡 37℃培养 45min；
④6000rpm 离心 5min，仅留 100μl 上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的 LB
平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化
子）
⑤将平板正向培养 1h，再倒置 37℃培养 14h。如果要求是 30 度则培养 20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入 10μl 质粒转化。另不要直接转表
达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至 LB 液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm 震荡培养 14h，根据实验需
要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期 90 天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于 4℃，保质期 7 天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于 4℃，保质期 7 天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期 90 天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20 度，90 天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直
接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入 EP 管中，加 100ul 无菌水将滤纸浸湿并浸泡 5min，吸
取 5ul 质粒转化，离心全涂
