α1-酸性糖蛋白(AGP)是一种血液中的52千道尔顿的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin),它保护组织免受炎症细胞的酶,特别是弹性蛋白酶的伤害。在某些急性期炎症反应中,AGP的水平会升高,以限制活化的中性粒细胞颗粒体及其弹性蛋白酶造成的损害。AGP的疾病包括AGP缺乏症,这是一种遗传性疾病,可能导致炎症期间严重的组织破坏。在严重的情况下,这可能导致肺气肿和肝硬化。AGP的遗传变异确实会发生。
α1-酸性糖蛋白(AGP)检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫吸附测定(ELISA),用于测量鸡生物液体中的AGP。
作为ALPCO在中国的区域总代理,强烈推荐ALPCO热销产品 α1-酸性糖蛋白(鸡)ELISA试剂盒,96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
α1-酸性糖蛋白(鸡)ELISA试剂盒,96孔 | ALP-41-AGPCH-E01 |
α1-酸性糖蛋白(鸡)ELISA试剂盒,96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附测定的原理在图1中表示。在这种测定中,样品中的α1-酸性糖蛋白(AGP)与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗AGP抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗AGP抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的AGP形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中AGP的浓度直接相关;因此,450纳米处的吸光度是测试样品中AGP浓度的量度。测试样品中AGP的量可以从标准品构建的标准曲线中插值得到,并根据样品稀释进行校正。
试剂(足够96次测定的数量)
1. 稀释液浓缩液(运行缓冲液)
一瓶含有50毫升5倍浓缩稀释液的运行缓冲液。
2. 洗涤液浓缩液
一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。
3. 酶-抗体结合物100倍
一瓶含有150微升亲和纯化的抗鸡α1-酸性糖蛋白(AGP)抗体,与辣根过氧化物酶结合,并在稳定缓冲液中。
4. 显色底物溶液
一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢,在柠檬酸缓冲液中,pH值为3.3。
5. 终止液
一瓶含有12毫升0.3M硫酸。
警告:避免与皮肤接触。
6. 抗鸡AGP ELISA微孔板
十二个可移动的八(8)孔微孔条,在孔架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗鸡AGP。
7. 鸡AGP校准品
一瓶含有冻干的鸡AGP校准品。
试剂准备
1. 稀释液浓缩液
提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)稀释1:5。
2. 洗涤液浓缩液
提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)稀释1:20。当储存温度较低时,浓缩液中出现晶体并不罕见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
3. 酶-抗体结合物
通过向每个微孔板测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升1倍稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。
4. 显色底物溶液
按供应状态直接使用。
5. 终止液
按供应状态直接使用。
6. 抗鸡AGP ELISA微孔板
按供应状态直接使用。揭开微孔板袋封口,从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有条和孔,放回袋中并重新密封。
7. 鸡AGP校准品
鸡AGP校准品应分装并冷冻保存。校准品现在的浓度为5.19微克/毫升。鸡AGP标准品需要在立即使用前准备(见下表)。每步之间充分混合。避免起泡。
最终反应混合物的稳定性:
在加入终止液后,最终反应混合物的吸光度可在长达2小时内进行测量。然而,良好的实验室操作规范要求尽快进行测量。
结果:
1. 从每个样品的测试值中减去平均背景值。
2. 使用标准观察到的结果构建标准曲线。适当的曲线拟合是四参数逻辑曲线。也可以使用二阶多项式(二次)或其他曲线拟合。
3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正血清稀释因子,以得到原始样品中AGP的浓度。
程序的局限性:
1. 当完全理解了说明书中的信息,并遵循良好的实验室操作规范时,将获得可靠和可重复的结果。
2. 可能影响测定性能的因素包括仪器的正确功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样品移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。
3. 不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。