皮质酮(小鼠/大鼠)ELISA使用说明&文献参考

点击次数:433次     发布时间:2024/9/26 8:51:40

 皮质酮是由肾上腺皮质在垂体激素ACTH的控制下通过负反馈机制分泌的。由于缺乏酶C17-羟化酶,它在大鼠中是循环中最多的类固醇,因为啮齿动物无法合成人类主要的糖皮质激素——皮质醇。

皮质酮在啮齿动物中具有广泛的活性。它调节碳水化合物、蛋白质和脂肪的代谢。它还对造血系统有影响,并且会减少淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的总数,但程度小于皮质醇。与皮质醇相比,皮质酮的抗炎活性非常小。

夜行性动物如大鼠的皮质酮水平表现出明显的昼夜变化,在一天的后半部分达到峰值,随后在早晨降至最低点(1),并且被认为在睡眠-觉醒周期中起重要作用(2)。这与白天活动的哺乳动物相反,在它们身上,糖皮质激素的峰值浓度出现在早晨。已经观察到,在基础和压力条件下,与雄性大鼠相比,雌性大鼠的皮质酮释放增加(6)。

测定大鼠体内的皮质酮对于进行神经生理学研究的设施、学术机构以及拥有药物研究部门的制药公司都有兴趣。影响内分泌系统的药物可以增加或减少肾上腺皮质的皮质类固醇产量。因此,大鼠血清中的皮质酮是潜在治疗剂副作用的理想指标。在大鼠身上看到的同样的效果通常也在人类身上看到。大鼠的血浆皮质酮通常与ACTH测量一起用作压力指标(3,4)。慢性压力对下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统功能的影响是年龄依赖的。最近的研究表明,衰老增加了大脑中皮质酮的基础水平,但并没有增加压力诱导的水平(5)。

 

小鼠/大鼠皮质酮ELISA是一种竞争性免疫测定方法,用于定量小鼠和大鼠血清或血浆中皮质酮的测定。仅供研究使用。不是为了用于诊断程序

 

皮质酮(小鼠/大鼠)ELISA检测原理:

小鼠/大鼠皮质酮ELISA试剂盒是一种固相酶联免疫吸附试验(ELISA),基于竞争性结合原理。未知量的皮质酮样品中存在一定量的与辣根结合的皮质酮过氧化物酶竞争皮质酮抗血清的结合位点微孔板。在摇床上孵育后,将微孔板洗涤四次。添加后底物溶液皮质酮的浓度与光学测量密度。

 

提供的试剂:

1. 微孔板

12 x 8(可拆分)条,共96孔;孔涂有兔抗皮质酮多克隆抗体。

2. 校准品0

1瓶,0.3 mL,即用型。

3. 校准品(校准品1-5)

5瓶,每瓶0.3 mL,即用型;浓度:15, 50, 185, 640, 2250 ng/mL。

 孵育缓冲液

4. 1瓶11 mL,即用型。

5. 酶结合物

1瓶,7 mL,即用型;皮质酮与辣根过氧化物酶结合。

6. 底物溶液

1瓶,22 mL,即用型;

含有四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢的缓冲基质。

7. 终止液

1瓶,7 mL,即用型;含有2N盐酸溶液。

8. 洗涤液

1瓶,50 mL(10倍浓缩);参见“试剂的准备”。

 

需要但未提供的材材料

? 离心机

? 能够进行450 nm终点测量的微孔板读取器

? 转速超过600 rpm的微孔板混合器

? 漩涡混合器

? 校准的可变精度微量移液器(10 ?L, 50 ?L, 100 ?L, 200 ?L, 1000 ?L)

? 吸水纸

? 蒸馏水或去离子水

? 计时器

? 半对数图表纸或用于数据整理的软件

 

试剂准备

使用前所有试剂应处于室温。

洗涤液:将50 mL的10倍浓缩洗涤液用450 mL去离子水稀释至最终体积500 mL。

稀释后的洗涤液在室温下至少稳定3个月。

 

储存条件

在2°C至8°C下储存,未开封的试剂可保持稳定直至过期日期。不要使用超过该日期的试剂。开封后的试剂必须储存在2°C至8°C。首次开封后,如果使用和储存得当,试剂可稳定30天。微孔板必须储存在2°C至8°C。确保铝箔袋密封严实。

 

典型校准器曲线示例:

以下数据仅用于说明,不应用于计算以下结果

皮质酮(小鼠/大鼠)ELISA

皮质酮(小鼠/大鼠)ELISA文献参考:

1. D?Agostino J, Vaeth GF & Henning SJ (1982): Diurnal rhythm of total and free concentration of serum corticosterone in the rat. Acta Endocrinologica 100, Vol. 1, 85-90.

2. Vázquez-Palacios G et al. (2001): Further definition of the effect of corticosterone on the sleep-wake pattern in the male rat. Pharmacol. Biochem. Behav. 70: 305-310.

3. De Souza EB & van Loon GR (1982): Stress induced inhibition of the plasma corticosterone response to a subsequent stress in the rat: A nonadrenocorticotropinmediated mechanism. Endocrinology 110, 1: 23-33.

4. Kant GJ, Leu JR, Anderson SM & Mougey EH (1987): Effects of chronic stress on plasma corticosterone, ACTH and prolactin. Physiology & Behaviour 40, 6: 775-779.

5. Garrido P, de Blas M, Del Arco A, Segovia G & Mora F (2010): Aging increases basal but not stress-induced levels of corticosterone in the brain of the awake rat. Neurobiol Aging.2010 Apr 21.

6. Handa RJ, Burgess LH, Kerr JE, O'Keefe JA (1994): Gonadal Steroid Hormone Receptors and Sex Differences in the Hypothalamo-Pituitary-Adrenal Axis. Hormon. Behav. 28 (4):464-76.

 

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