细胞名称：小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞货号：IMP-M194分离方法：磁珠分选组织来源：C57小鼠细胞形态：圆形、淋巴母细胞样生长特性：悬浮生长背景简介：T淋巴细胞是来源于骨髓的多能干细胞，在骨髓中由其前体细胞产生，随后迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。作为淋巴细胞的主要组分，T细胞具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，是身体中抵御各种病原微生物感染、抑制肿瘤形成的“斗士”。
细胞特点
01. 细胞杀伤与靶细胞特异性结合，通过释放颗粒酶，穿孔素等，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；
02. 免疫应答通过细胞表面的T细胞受体，识别抗原提呈细胞提呈的抗原，从而发挥免疫学功能；03. 调节B细胞分化分泌细胞因子、蛋白质或缩氨酸用来调控其它的免疫细胞；如白介素，可以使得B细胞分化成浆细胞；
04. 免疫记忆功能机体受到病原体的二次侵入时，记忆T细胞可更加迅速的再次破坏靶细胞即受病菌或病毒感染的细胞，释放出靶细胞中的抗原；
05. 产生细胞因子T淋巴细可产生多种细胞因子，如干扰素、转移因子、白细胞介素等，这些淋巴因子，具有杀伤肿瘤细胞，刺激造血组织，对抗化疗副作用等功能。
材料准备
01. 材料4-6周C57小鼠、BeaverBeads™ 小鼠 CD3+T淋巴细胞分选试剂盒 、红细胞裂解液、眼科镊、眼科剪、细胞筛网、PBS缓冲液、逸漠生物小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞专用培养基。
02. 培养基和缓冲液将培养基和添加剂置于室温，使用前室温中预温10-30 min。HBSS缓冲液缓冲液预冷，紫外照射完毕后，75%酒精消毒超净台，超净台通风10 min以上。03. 培养瓶准备25cm2的培养瓶。
操作步骤
1. 将小鼠脱颈处死，在75%乙醇中浸泡5min，使用剪刀打开小鼠腹腔，取出小鼠脾脏，使用PBS冲洗两遍。2. 在70 μm 细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS 冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于 50 mL离心管中，500 g，离心5 min。
3. 离心结束，弃上清，加入5 mL红细胞裂解液（ACK），室温裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g， 离心5 min。 4. 将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm 细胞筛网过滤后，计数，调整细胞密度为1×108 cells/ml。 5. 按照每100 μL 细胞悬液（1×107个细胞）对应2 μL Biotin-Antibody Mix加入无菌流式管底部，混匀后 4°C 孵育10 min。6. 孵育完成后，在流式管中加入 20 μL BeaverBeads® Streptavidin （1×107个细胞） （使用前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完 全重悬），混匀后4°C 孵育10 min。 7. 孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL 分选buffer，用移液器上下混合吹打5次混匀（避免剧烈振荡或者 上下颠倒混匀）。 8. 将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置5 min。将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中（倾倒过程中流式管不要脱离磁力架），此细胞悬液中即包含 纯化的小鼠CD3+T细胞，500 g，离心5 min。离心后弃上清，收集细胞， 将细胞重悬于培养基中，即可用于后续扩增。
CD3是成熟T细胞的标记物,是识别CD3+T细胞最可靠的标志，此外，也可通过检测TCR来识别CD3+T细胞。
注意事项
● 轻轻吹打T25细胞培养瓶中的培养基使细胞悬浮。● 吸取培养瓶中所有培养基，在离心机中以1000转离心5 min。● 弃去上清，加入新的培养基重悬，于培养瓶中培养。● 建议1：2传代。● 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。● 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。●根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~ 1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1 mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。● 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。
研究应用
CD3+T细胞可代表成熟的T淋巴细胞在抗肿瘤治疗中T细胞是人体免疫系统的重要组成部分，通过识别和攻击被感染的细胞或异常细胞，在保护机体免受病原体和肿瘤侵害方面发挥着关键作用。实验研究：通过分离T淋巴细胞可用于在体外研究T淋巴细胞引起炎症反应的机制，从而通过药物等方法抑制T细胞活力缓解患者自身的免疫病理损伤。TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）疗法：从患者体内提取肿瘤组织中的T细胞，并在实验室中扩增和改造，使其能够更有效地识别和攻击癌细胞。TCR（T细胞受体）疗法：通过提取患者的T细胞，并在其中加入一个可以表达T细胞受体的基因，使T细胞产生特异性的T细胞受体，从而能够追踪并杀死癌细胞。CAR-T（嵌合体抗原受体T细胞）疗法：从患者血液中提取T细胞，通过基因改造加入一种制造嵌合体抗原受体的基因，使改造后的T细胞能够特异性地追踪并杀死癌细胞。
