1. 取 1.5 ml 离心管(自备),加入 20 μl 的 Proteinase K 溶液。
2. 向离心管中加入 200 μl 血清、血浆、病毒拭子保存液或病毒原液、无细胞体液等,再
加入 200 μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀。
3. 56℃孵育 10 min,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
4. 加入 250 μl 无水乙醇,涡旋震荡 15 sec,室温放置 5 min,使溶液温度降至室温,短
暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
(注意:如果环境温度超过 25℃,无水乙醇应在冰上预冷后使用。)
5. 将一个吸附柱放入收集管中,将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中,12,000 rpm 离
心 30 sec,弃收集管中的滤液。
6. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer RW1,室温 12,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
(注意:在 Buffer RW1 浓缩液中按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
7. 向吸附柱内加入 600 μl 的 Buffer RW2,室温 10,000 rpm 离心 30 sec,弃收集管中滤液。
(注意: Buffer RW2 按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发;如需进一步提高核酸纯
度,可重复步骤 7 一次。)
8. 室温 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留液体。
(注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组 DNA/RNA 的后续使用)
9. 将离心吸附柱置于一个干净的离心管中,小心打开吸附柱的盖子,室温放置 2 min,
使吸附膜完全变干。
10. 加入 30 - 100 μl Buffer RE 或 DEPC-H2O(自备),室温放置 2 min。
1
2,000 rpm 离心 1 min,
离心管底溶液即病毒 DNA/RNA。
(注意:为增加洗脱效率,可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置 2 min,再次离心收集)
注意事项
样品避免反复冻融,否则会使蛋白变性或产生沉淀,导致提取的 DNA/RNA 片段小,提
取量下降。
如 Buffer GL、Buffer RW1 结晶或产生沉淀,可在 56℃水浴溶解。
所有离心步骤均为室温下操作。