Tregs小鼠调节T细胞培养说明书
一、细胞培养条件
二、细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用 75%精喷洒整个 细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入 37℃、5%CO2的培养箱中静置 3-4 小时以稳定 细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好 40x,100x,200x
各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全
培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后拧松瓶盖）
三、细胞培养步骤
细胞传代：如果未超过 80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留 5ml 完全培养基，放入 37℃、
5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超 80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下细胞传代：
a、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃上清液，补加 1-2ml 培养液后吹匀，将细胞悬液按
1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到 新的含 8ml 培养基新皿中或者瓶中。
b、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm 离心 5min；
2、弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的雅吉生物无血清冻存液（C7001），混匀后加入冻存中。（如：冻一 支，加入 1ml 无血清冻存液即可）
3、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存 放 24 小时以上。
C、细胞复苏： 产品名称
Tregs 小鼠调节 T 细胞
生长特性 悬浮 ，圆形
冻存条件 无血清冻存液
培养体系 DMEM+10%FBS+1%双抗
传代方法 建议 1:2 传代
传代情况 2~3 天换液/传代
备注
悬浮细胞请离心收集，切勿直接倒掉细胞培养液！ 用无菌离心管收集瓶子中培养基作过渡对比培养。 如果对比培养效果不好，建议直接购买完全培养基。切勿直接倒掉细胞培养液。NO.YS2212C
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结 晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶，放于 37℃,5%CO2细胞养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项：该细胞难养，收到细胞可按以下方法操作：
半换液处理，竖着培养瓶在培养箱静置 1 小时左右，轻轻吸掉 3ml 左右培养基然后补给 3ml 的完全
培养基，如果培养基变色慢，可直接加 500ul 左右 FBS，传代的时候可以直接给 5ml 培养基，分两个培 养瓶培养，一般这样传代 3 次左右可以离心传代一次，掉死细胞
五、售后服务告知书
1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品 48 小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置 24 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后，绝大多数细胞未存活，（需提
供真实清晰的细胞状态照片），重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后或常温发货的细胞静置 4 小时候并且未开封，出现污染，重发；
5. 细胞活性问题，请在收到产品 7 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实 后予重发；
6. 细胞收到当天以及第 2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题有提供收到细胞 前 3 天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判 定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的 50%收费重 发。
二）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
1. 客户造成细胞污染，不重发；
2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前 3 天照片的，不重发；
5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；
6. 细胞收到 2 天内，未告知，不重发；
7. 视具体情况而定。
