38C13小鼠B淋巴瘤细胞培养说明书
一、细胞培养条件
二、细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用 75%酒精
喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入 37℃、5%CO2的培养箱
中静置 3-4 小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同
倍数拍照保存（最好 40x,100x,200x 各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默
认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶
的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）
三、细胞培养步骤
细胞传代：如果未超过 80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留 5ml 完全培
养基，放入 37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超 80%，即可进行传代培养，传代具体步
骤如下细胞传代：
A1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃上清液，补加 1-2ml 培养液后吹匀，
将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到
1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基新皿中或者瓶中。
A2、悬浮细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，将 T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中 1000rpm
离心 5min；
2、弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的雅吉生物无血清冻存液（C7001），混匀后加入冻存管
中。（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液即可）
3、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小时以上。
产品名称 38C13 小鼠 B 淋巴瘤细胞
生长特性 半贴壁半悬浮
冻存条件 无血清冻存液
培养体系 1640+10%FBS+1%双抗
传代方法 第一次建议 1:2 传代
传代情况 2~3 天换液/传代
备注
悬浮细胞离心收集，请勿直接倒掉细胞培养液！ 贴壁细胞，请按贴壁细胞处理。
B1、对于贴壁细胞，传代可参考如下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1-2ml 至培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2min，然后 在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加 5ml 以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，在 1000RPM 条件 下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按 1：2 的比例进行分瓶传代（两个 T25 瓶），补充新的完全培养基至 5-8ml/ 瓶，最后放入到 37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
B2、贴壁细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入 1ml 的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻 存管中。
细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直 至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶，放于 37℃,5%CO2细胞培养箱 中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正
常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm 离心 5min，收集上清作过渡培养（后
期对比培养），沉淀加入胰酶 1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加 5ml 完全培养
基终止反应。再离心，弃上清，加 1-2ml 完全培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两
个 T25），补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2细胞培养箱中培养
