注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：YX-W-B603
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂10mg×1支，4℃保存；临用前配置成0.1mg/mL的葡萄糖标准水溶液； 试剂二：粉剂×1瓶， 4℃保存；
产品说明：
微量法
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理：蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、浓硫酸（不允许快递） 和蒸馏水。
操作步骤：
一、糖原提取：
1﹑细胞或细菌：收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL 提取液超声波破碎细菌或细胞（功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；转移至10mL 试管中， 置于95℃水浴20min（盖紧，防止水分散失），隔5min 振摇试管1 次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
2﹑组织：称取0.1~0.2g 样品，置于10mL试管中；加入0.75mL提取液，置于95℃水浴20min（盖紧， 防止水分散失），隔5min振摇试管1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
二、步骤和加样表
1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。调节水浴锅至95℃。
2、在试剂二中倒入6mL 蒸馏水，缓慢倒入24mL 浓硫酸，充分溶解混匀后使用。4℃有效期一周。
3、加样表（在 EP 管中反应）：
| 试剂 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
| 待测样本 |
|
| 60 |
| 试剂一 |
| 60 |
|
| 蒸馏水 | 60 |
|
|
| 试剂二 | 240 | 240 | 240 |
混匀，置95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL 转移至微量比色皿或96 孔板中，于620nm 波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A1、A2 和A3。
注意：1、空白管和标准管只要测一次。
2、如果A3-A1 大于2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应的稀释倍数。三、糖原含量的计算：
1、按照样本鲜重计算
糖原（mg/g 鲜重）=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)
= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)
=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
3、按照细菌或细胞数量计算
糖原（mg/104cell）=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(细菌或细胞数量×V1÷V2)
= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷细菌或细胞数量
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即111μg 糖原用蒽酮试剂显色相当于
100μg 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色；C 标准管：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反应体系中待测样本体积，0.06mL；V2：提取液体积，5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；细菌或细胞数量：以104为单位，万个。
注意：最低检测限为10ng/g 鲜重或0.1ng/mg prot。
