K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨细胞)在Balb/c小鼠中形成肿瘤，在超过90%的接种小鼠中自发转移到肺部。K7M2-WT细胞抗原表达：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2-WT细胞骨家族细胞特性。
生长培养基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推荐传代比例 | 1:3-1:4 |
推荐换液频率 | 2~3次/周 |
倍增时间 | ~31小时 |
细胞形态 | 成骨细胞样 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
冻存条件 | 55% 基础培养+40%FBS+5%DMSO |
培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ |
细胞复苏 01：将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性手套，将细胞从液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以一分钟内全部溶解为宜； 02：将解冻的细胞放入装有新鲜培养基的离心管中，打开盖子前，用75%酒精擦拭冻存管外部； 03：1200rpm离心3分钟左右，离心完毕后去掉上清； 04：取适量与细胞配套的完全培养基重悬细胞，并接入到无菌容器中，补充一定量培养基，再放入培养箱培养。 细胞冻存 01：配置冻存液。由于DMSO配置时会发热，一定要等冻存液冷却后再使用，避免灼伤细胞； 02：细胞消化好后用新鲜培养基终止，制成细胞悬液，1200rpm离心3分钟左右，尽量吸尽上清； 03：加入配置好的冻存液，调节浓度至大约1×106个细胞/mL，分装到细胞冻存管； 04：分装好的冻存液转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜； 05：从-80℃冰箱取出冻存管，并迅速转移到液氮长期保存。 细胞传代 1：将培养基吸出丢弃，加入2mL PBS润洗； 2：吸出PBS丢弃，加入2mL胰酶润洗； 3：放入培养箱消化2-3分钟，轻拍培养皿侧壁，看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后，加入2mL完全培养基终止消化； 4：将细胞轻柔吹打，使细胞混匀为悬浮液，根据需求进行接种。 小贴士 细胞密度不能太低；润洗时要注意将所有细胞都浸润到。 培养注意事项 1：该细胞对外界刺激较为敏感，建议使用新鲜的DMEM高糖培养基，培养基出现发紫现象时不建议继续使用，且及时更换新鲜培养基； 2：该细胞贴壁不牢，会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗，悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶； 3：该细胞传代时请注意消化程度，请勿消化过度。
