土壤脲酶(S-UE)分光法试剂盒
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号: YX-C-B933
规格: 50T/24S
产品内容:
试剂一:甲苯 10mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入 20mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存; 试剂三:液体 65mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四 A 液:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;
土壤脲酶(S-UE)分光法试剂盒
可见分光光度法
试剂四 B 液:液体 8mL×1 瓶,4℃保存;临用前将 A液倒入 B 液中混合,待用;未用完的液体
4℃保存一周。
试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体 1mL×1 支, 1mg/mL 氮标准液
产品说明:
S-UE 能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。
本法以尿素为基质,利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 630nm,蒸馏水调零
2、培养
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.25 | 0.25 |
试剂一(μL) | 125 | 125 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min | ||
试剂二(μL) | 625 |
|
蒸馏水(μL) |
| 625 |
试剂三(μL) | 1250 | 1250 |
混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 常温离心 10min,取上清液。
2、将培养结束的上清液稀释 10 倍(取 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸馏水)若吸光值仍大于 1.5 继续稀释。
3、标准品的准备:吸取适量的标准溶液,稀释至 10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/ml。
4、测氨量
| 测定管 | 对照管 | 标准管 |
稀释后的上清液或标准液 | 400 | 400 | 400 |
试剂四(μL) | 80 | 80 | 80 |
试剂五(μL) | 60 | 60 | 60 |
充分混匀,室温放置 20min | |||
蒸馏水(μL) | 460 | 460 | 460 |
混匀,630nm 处蒸馏水调零,测 A 值,ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。
标准曲线的建立:根据标准管的浓度(y)和吸光度(x,减去浓度为 0 的空白管),做标准曲线。
脲酶活力的计算:
根据标准曲线,将ΔA(x)带入公式计算测定中样品的浓度(μg/mL)y 值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶活力(U/g 土样)=y×10×V 反总÷W÷T=80×y
10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V 反总:反应体系总体积:2mL;W:样本质量,0.25g。
土壤脲酶(S-UE)分光法试剂盒