本期将主讲有限传代细胞，及其代次管理方法。快来查收吧！
如有疑惑，请在文末留言。 #常见的有限传代细胞 有限传代细胞属于二倍体细胞，它的核型相对稳定，与生物体细胞特性更加相似，其对代次要求也更高。因有限传代细胞的分裂存在一个极限，所以在达到该极限值后，细胞将不再继续分裂，并会导致衰老、死亡，不能进行无限增殖。 常见有限传代细胞如表1所示： 货号 名称 中文名称 理论 代次 CL-0161 MRC-5 人胚肺细胞 ~60 CL-0243 WI-38 人胚肺细胞 ~60 CL-0106 HFL1 人胚肺成纤维细胞 ~60 CL-0538 IMR-90 人胚肺成纤维细胞 ~60 CL-0657 PUMC-HUVEC-T1 SV40T转化 人脐静脉内皮细胞 ~60 CL-0056 CCD-1095Sk 人乳腺浸润性 导管癌旁皮肤细胞 ~10 表1. 常见有限传代细胞 注意： 有限传代细胞应在细胞理论代次前2/3使用（如MRC-5，一般40代前状态较好）。 #为什么细胞有传代限制 1965年，微生物学家Leonard Hayflick提出海夫利克极限，该实验中发现了人体细胞分裂次数上限为“56”， 被认为是机体衰老的原因。 1975年，Elizabeth H.Blackburn等人发现端粒，其由简单的DNA高度重复序列组成，保证每条染色体的完整性，而端粒的长度反映了细胞复制史及复制潜能。 正是因为端粒限制着细胞分裂次数，所以传代培养的细胞有了传代限制。同时，对于不同物种细胞体外培养代次也有所不同，如表2所示。 动物 细胞群体倍增次数 龟 90~120 人 40~60 小鼠 14~28 表2. 体外培养的胚胎成纤维细胞的平均培养代数 以上就是有限传代细胞的基本信息。接下来，我们讲一下它的代次管理！ #为什么要进行代次管理 细胞状态 有限传代细胞会衰老，其细胞形态特征和生长速度等会发生变化。 遗传特性 有限传代细胞随着传代次数的增多，在传代过程易产生遗传漂变，基因/蛋白表达发生变化。 细胞库管理 细胞库管理属于细胞库分级管理标准之一，而代次管理属于细胞库管理内容之一。 #代次计算 对于有限传代细胞代次的计算，我们可以采用记录细胞群体倍增数（PDL）的方法。 公式如下： PDL =X+3.322(log Y – log I) X为传代前代次，I 为细胞接种前细胞数，Y 为培养后细胞总数。 注意： 1. 常规培养时，1:2传代代次+1，1:3传代代次+1.5； 2. 扩增培养记录接种细胞量以及收获细胞量，根据公式计算代次。 #细胞代次管理 细胞的代次管理，共有以下三个步骤： 细胞引进 当我们得到一个新的细胞，就要记录该细胞的初始代次。 扩增培养 对细胞进行扩增培养时，可以根据传代过程记录代次。 分级冻存 在进行细胞冻存时，可以根据不同级别冻存库，对细胞代次进行控制。 注意： 1. 常规培养时按照1:2传代，记录每次传代后代次； 2. 冻存细胞根据细胞数量计算细胞代次，最后冻存的批次进行传代数检测。 #有限传代细胞传代测试 在进行细胞复苏后，以一定密度接种至孔板培养，每次密度达到80%传代，需记录传代次数及传代间隔。（要求：在预计传代次数内，细胞形态无明显差异，传代时机间隔无明显变化。） 如测试后未达到预期传代数，可进行细胞衰老检测。 细胞衰老检测方法 在进行检测时，我们常用到细胞衰老β-半乳糖苷酶检测试剂盒。细胞在PH值为6时，β-半乳糖苷酶阳性率随代龄增加而逐渐上调。衰老细胞/组织产生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X-Gal生成蓝色产物（如下图所示）。
