科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型,这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。
而在收到细胞库寄送来的常温细胞时,常常会遇到一些问题,比如细胞脱落、皱缩、有黑点。 这篇文章将帮助大家解决这些常见问题。 收货时,细胞脱落 01 有些细胞本身贴壁不牢,很容易脱落(如293系列,TM3,TM4,Raw264.7,原代内皮细胞,原代平滑肌细胞)。 另外,运输过程中受到碰撞或气温过低,也可能导致细胞脱落。 处理办法 ① 脱落的细胞进行离心收集,并在离心管中消化。 ② 仍然贴壁的细胞,按照常规方法加入胰酶或其他解离剂消化。 ③ 再将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合,按比例接种到新的培养器皿中。 收货时,细胞皱缩 02 运输过程中,路途颠簸加上温度不稳定,常温细胞会发生回缩。 处理办法 放入培养箱静置2-4小时,若4小时后仍然没有伸展,延长静置时间。注意,过夜静置时,需倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松透气,保持气体交换(L15培养体系除外)。 若有脱落细胞,需离心收集。 处理后第三天 (图片由客户提供,仅供学习参考) 收货时,细胞黑点较多 03 当受到运输环境影响时,细胞会发生应激反应,分泌活动增加,导致分泌蛋白增多,呈黑色圆球状,分布无规律。 同时,路途中凋亡的细胞碎裂后将产生细胞碎片,为黑色或透明色,呈不规则状,分布无规律。 另外,有些细胞本身分泌活动较强,培养时常伴随黑点。 处理办法 ★贴壁细胞放培养箱静置2-4小时后,正常换液或传代; ★悬浮细胞800~1000rpm(约160~200g) 低速离心3min去除碎片。通常培养数天后,细胞状态会逐渐稳定下来。 小贴士:遇到小黑点问题时,首先要排除微生物污染,再按以上办法解决哦~ 细胞碎片/分泌物和微生物污染的区别 细胞碎片/分泌物 微生物污染 形态 大小不一的黑色圆点,或不规则形状 圆球状或杆状, 形态非常规则 是否运动 原地震动,布朗运动 或相对液体静止 快速游动,快速转圈或 相对液体静止 分布情况 视野中分布无规律 视野中分布均匀 增长情况 无抗生素条件下 不增多或缓慢增多 无抗生素条件下 48-72小时内爆发式增多