Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌,人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后,自发分化为肠上皮样细胞,是常用的肠癌细胞模型。 本文为大家介绍Caco-2细胞生长特性和常见问题解决策略。 生长特性:呈岛状生长 Cco-2细胞群的边界光滑,视野中一个个细胞克隆如同海上小岛一般。 空泡多 Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡,这是细胞本身的特性,属于正常现象。 难消化 Caco-2细胞与细胞间连接紧密,使得细胞难以解离。通常加入胰酶后,细胞克隆的四周先飘起来,中间仍贴壁;随后整片克隆脱落,但细胞与细胞间不会分散。消化时间为5-10分钟,该细胞难以被吹散为单个细胞,当细胞能够被吹散为小的细胞团块,即可终止消化。 贴壁慢 Caco-2贴壁缓慢,在标准培养条件【MEM(含NEAA)+20% FBS+1% P/S】下,接种后约24~72小时完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。 生长慢 Caco-2细胞传代周期较长,这是因为Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:4传代的情况下,约一周传代一次。 常见问题 细胞不贴壁怎么办? Caco-2细胞培养基里添加的胎牛血清比例为20%,当血清比例降低,贴壁性下降时,补充胎牛血清至20%,继续培养1-2天,细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱(呈紫红色),偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁 能否用DMEM培养基替代MEM培养基? 可以。DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培养基的基础上研制的。Caco-2细胞在DMEM+20%FBS+1%P/S条件下生长状态正常。 MEM中不含NEAA会怎样? 当用不含NEAA的MEM培养基时,Caco-2生长速度可能下降,漂浮细胞增多。 细胞消化不下来怎么办? 如果消化5-10分钟,细胞部分脱落,另一部分仍然贴壁紧密,可以将脱落细胞转移至离心管,向原瓶中加入新的胰酶,放入培养箱继续消化剩余细胞,每隔1min拿出来观察,直到细胞滑落。 漂浮细胞多怎么办? 有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上,是正常的,随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞,可以减少漂浮细胞产生。 如果Caco-2细胞随着培养过程,漂浮得越来越严重,甚至大块儿飘起,就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。 注意事项 01 Caco-2细胞贴壁慢特别是刚复苏时,一般2-3天贴壁 展开,会有空泡。 02 Caco-2细胞在传代细胞中,注意消化散,否则难以贴壁。 03 成团生长,Caco-2细胞密度越大,表面空泡黑点越多。 04 一般Caco-2细胞长至80%传代,细胞成片,其实密度很大。 05 Caco-2细胞生长太满对细胞状态影响严重,传代后易碎,死亡。 06 Caco-2细胞生长时间越长,消化时间越长。 基本资料 Caco-2 (人结直肠腺癌细胞) 细胞别称 CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC 组织来源 男;72岁;结肠,结直肠腺癌 生长特性 贴壁细胞 细胞形态 上皮细胞样 生长培养基 MEM+20% FBS+1% P/S 推荐传代比例 1:3-1:4 推荐换液频率 48-72小时/次 冻存液 55% MEM+40%FBS+5%DMSO 温馨提醒: 如果您想要了解或选购细胞系或者原代细胞,请点击我要选购,有任何疑问也可以点击右方的在线咨询,专业技术人员将为您提供解答。