pSilent-1质粒的操作流程

点击次数:1040次     发布时间:2021/12/8 10:47:26

 基本信息:
平台编号:zl-041505
启动子:    TrpC
复制子:    pUC
终止子:    TRPC
质粒分类:    丝状真菌载体;RNAi基因沉默干扰质粒
质粒大小:    7056bp
原核抗性:    Amp
筛选标记:    Hyg
克隆菌株:    DH5a
培养条件:    37度
表达宿主:    丝状真菌
5'测序引物:    根据序列设计
3'测序引物:    根据序列设计

收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养)(本步骤仅作示例,非该产品的实际步骤)。


 1.收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;

 2.取1支100ul感受态于冰上解冻10min,加入2ul质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

 3.加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养49min;

 4.6000rpm离心5min,仅留100ul上清液重悬细菌沉淀,并涂布目标质粒抗性的LB平板上;

 5.将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化);

 6.挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

联系我们

TEL:021-34661275  点击拨打热线