雅吉质粒扩增说明书

点击次数:799次     发布时间:2021/7/29 11:21:55

 一、产品信息

产品形式 运输方式 保存温度 保存期限
质粒干粉 常温 -20度 90天
菌落平板 冰袋 4度 7天
穿刺菌 冰袋 4度 7天
甘油菌 冰袋 -80度 90天
液体质粒 冰袋 -20度 90天
二、扩增流程
         收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
        1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)

        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
        ②取2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激90s,再冰浴2min;
        ③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
        ④6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀,并全涂至对应抗性LB平板上;
        ⑤将平板正向培养1h,再倒置培养14-16h。如果是30度培养则培养20h
(如果第二天菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果第二天无菌落,请加入
10μl质粒转化)
        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入抗生素,37℃震荡培养14~16h,根据实验需要提取质粒。
        2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏。
        3、穿刺菌:穿刺接种后四区划线,挑单菌落培养。
        4、平板:直接挑单菌落液体培养。
        5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

三、转化图片

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