神经元细胞属于终末分化细胞,细胞本身体外不增殖;但是在合适培养条件下,神经元突触会再生长。
神经元细胞本身贴壁不牢,易脱落,细胞贴壁需用PLL(多聚赖氨酸)包被处理培养瓶或培养器皿。
由于细胞贴壁不牢,运输会导致细胞收缩、脱落、聚团等状况。
1、 细胞收缩:收货后观察状态,收缩未脱落,更换培养液,继续培养,3天换液一次,等5-7天可见细胞突触生长,(注:细胞培养液必须37℃预热,冷培养液会导致细胞收缩脱落)。
2、 脱落、聚团:收集细胞,离心得细胞沉淀,沉淀经0.25%胰酶消化2-3min后,终止消化,PBS离心洗涤,重新接种,接种时使用包被过器皿,最好直接接种于实验器皿,贴壁之后正常换液培养实验(如果细胞不贴壁,可适当添加5%FBS,促进贴壁,持续加血清培养,会增加杂细胞),请避免再次消化。
3、 注:胰酶消化会损伤细胞,请避免多次消化;暴力机械吹打会损失细胞,请轻柔操作;神经元本身不增殖,长时间培养部分杂细胞会增殖变多,此类杂细胞本身更利于支撑神经元细胞生长,如果刻意在乎细胞纯度,请勿长时间培养。